猪戊型肝炎(4)

研究生论文

摘 要

为了解屠宰猪体内戊型肝炎的感染情况，本研究从北京几个大型的生猪屠宰加工厂采集了581份屠宰猪肝脏样品和139份猪血清样品，采用免疫组织化学方法检测肝脏样品中HEV相关抗原的分布情况；针对HEV ORF2区设计的简并引物，用巢式RT-PCR方法检测肝脏样品中HEV核酸，对扩增产物测序，用DNAMAN和MEGA4.0进行序列分析并绘制遗传进化树；同时，采用HEV-Ab ELISA诊断试剂盒检测了血清中的HEV抗体水平；并采用H.E染色方法观察了HEV免疫组织化学阳性肝组织的病理学变化，对HEV免疫组织化学强阳性的肝组织进行了超微结构观察。研究结果如下：

1.免疫组织化学观察结果表明，在581份屠宰猪肝脏中检出了HEV抗原阳性样品536份，检出率高达92.25%。显微镜下观察可见，HEV阳性反应物主要呈胞浆弥漫型、胞核型两种类型分布。在HEV免疫组化呈阳性反应的肝脏，具有共同的反应特点，即位于肝被膜附近的肝组织中的阳性反应信号常散在分布，远离被膜的肝组织，阳性反应信号常成片分布，小叶间胆管的上皮细胞呈阳性反应。

2．H.E染色切片观察结果表明，536份HEV免疫组织化学染色阳性的肝组织都存在不同程度的病理变化，病变率100%。病变表现为肝细胞变性，散在单个核固缩性坏死，淋巴细胞等炎性细胞浸润、汇管区胆管增生，肝细胞萎缩，纤维结缔组织增生等。

3.巢式RT-PCR从114份肝脏样品中扩增到2条产物，与预期片段348 bp大小基本一致，位于HEV ORF2区，用DNAMAN和MEGA4.0进行序列分析、比较显示，扩增出的2个片段同源性为99.2%，与HEV基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性分别为74.9%～78.7%，73.9%～74.1%，74.6%～77%和81.2%～93.7%。用扩增的核苷酸片段绘制的基因进化树显示，2个分离株与HEV基因Ⅳ型AJ344171、AJ344172和AJ344183位于同一分支，属于HEV基因Ⅳ型。

4.ELISA检测结果：105份屠宰猪血清中有93份为阳性，阳性率为88.57%。

5．对139份屠宰猪血清ALT 和AST的检测结果表明，76.98%的样品血清ALT异常升高；79.10%的样品血清AST异常升高；而且有69.40%的血清样品中ALT 和AST同时异常升高，超出正常值。

6.肝脏的超微结构观察发现，肝细胞胞浆空亮，细胞器减少；线粒体肿胀，嵴断裂、缺失，甚至空化。免疫电镜观察发现肝细胞胞浆内有HEV病毒样粒子。

上述研究结果从HEV蛋白和基因两个角度都证明了屠宰猪肝脏中HEV的存在，并且证明猪的HEV与人的HEV有很大的相关性。这表明在我国的猪群中，HEV的感染率很高。应引起公共卫生部门的重视。

关键词：屠宰猪，戊型肝炎病毒，免疫组织化学，巢式RT-PCR，ELISA，病理学