猪戊型肝炎(17)

研究生论文

成熟蛋白（gpORF2）（Zafrullah M et al.,1999）。Jamee等(1996)等用猴肾细胞表达ORF2发现，p ORF2同时存在于细胞表面和细胞浆中。在细胞表面，p ORF2聚集于某些局部区域，p ORF2可通过非共价作用形成同源二聚体，提示p ORF2蛋白亚单位可能相互作用组装成高级结构形式。Robinson等（1998）在昆虫细胞中表达p ORF2，获得30KD～100 KD不等的多种蛋白产物，其中表达量较高的蛋白分别是72 KD、63 KD、56KD和53 KD 。其中p ORF2 53 KD可组装成病毒样颗粒（VLP），是T=1的二十面体对称（Xing L,1999）。对其进行研究在HEV诊断和疫苗研制中具有重要意义。

p ORF2上抗原表位数量多，结构复杂，除N端25～38aa外，大多数分布在C端2/3部分。1992年Kaur(1992)定位了p ORF2 25～38，341～354，517～530aa ，3个抗原活性区，Khudyakov等1993年定位了319～340，422～437，631～648，641～660aa，4个抗原活性区，1994年又发现在390～470aa和546～580aa上还有两个抗原决定簇区段，进一步深入研究证实在394～470aa之间至少含有5个不同免疫活性的抗原表位（Khudyakov YuE et al., 1993; Khudyakov YuE et al.,1994）。Li等（Li F et al.,2000; Li F et al.,1997）在大肠杆菌中表达了不同区段的GST-ORF2融合蛋白，发现GST-ORF2.1（394～660aa）内存在恢复期血清IgG抗体构象表位，GST-ORF2.3（1～110aa）代表的构象表位与急性期血清IgG和IgM有关。ORF2全长编码的GST-ORF2蛋白只与急性期血清反应而无恢复期血清的反应性。Purdy等（1993）在研究大肠杆菌表达的HEV-trpE融合蛋白C2（24～660aa）时，也指出ORF2蛋白C端2/3的部分其抗原表位与高级结构有关。

（3） ORF3编码蛋白（p ORF3）

ORF3编码产物为磷酸化蛋白，分子量大小为14KD，其N端含有两个疏水结构域，16～32aa，定位在核骨架和和7～62aa，p ORF3通过第一疏水区与细胞骨架结合（Zafrullah M et al., 1997）膜支架部位；磷酸化修饰位点位于相对保守的第80位Ser残基上。其主要功能不明。

Tyagi等利用荧光共定位技术，酵母双杂交实验，免疫沉淀实验和无细胞系体外转录-翻译技术证实，ORF3和ORF2可以相互作用，并且ORF3（57～81aa）的26个氨基酸和第80位Ser残基的磷酸化是必须的。ORF3在基因组中的位置和ORF2的相互作用提示在病毒结构组装中有很好的调节作用（Tyagi S et al., 2002）。

p ORF3含有多种蛋白激酶的识别序列，体外磷酸化实验表明，p ORF3可被促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化，进一步研究显示p ORF3是胞外信号调节激酶（ERK）和应激活化蛋白激酶C-Jun N端激酶等MAPK超家族的底物，提示其在HEV感染的细胞信号传导途径中的重要作用。

ORF3编码的蛋白主要参与产生急性期血清HEV IgG。李凡，庄辉等用大肠杆菌表达ORF3全长蛋白，发现其对急性期血清呈强阳性反应，但随着病程的延长阳性率下降（Li F et al., 1994）。如果利用不同型ORF3作诊断试剂，不但可以准确检查出戊型肝炎病毒基因型，而且对诊断急性戊型肝炎有意义。 1.3.2.3基因型

有关HEV的基因分型，目前是根据HEV各分离株之间的氨基酸同源性的大小及系统进化树分析，将世界上已有的HEV分为4个基因型（Schlauder GG et al., 2001）：

（1）基因型Ⅰ，以缅甸株为代表，包括中国的新疆株、缅甸株、巴基斯坦株、吉尔吉斯坦