溶液标记是广泛使用的标准标记方法，该策略需要许多人为操作步骤，如样品除 盐，添加标记试剂，孵化反应，终止反应，样品混合，除盐等，这些都会影响样 品的回收率和分析的重复性，而且费时费力，容易出错。我们将使用我们发展的 基于两相柱的固相标记定量多维分析的平台开展相关蛋白组学研究。 平台将固相 标记与多维分析结合，有利于定量的自动化实现蛋白质组的通量化分析，可以在 30个小时（包括标记时间）定量分析1000多个蛋白质。 2. 利用抗体亲和富集技 术开展蛋白质组乙酰化组分析。 蛋白质组乙酰化分析的关键是如何有效富集乙 酰化肽段。我们制备的抗体可以高特异性的将乙酰化肽段富集出来。蛋白质组样 品经过分级后，每个组分分别用蛋白质酶切。然后利用抗体将赖氨酸残基乙酰化 的肽段富集出来，接着利用液相色谱质谱连用分析富集的肽段，最后利用数据库 检索和数据处理实现乙酰化蛋白质与其修饰位点的鉴定。 利用该方法分析蛋白质 组乙酰化，可以鉴定上千个赖氨酸乙酰化蛋白质。 3. 采用固定亲和技术进行蛋 白质组磷酸化分析。 蛋白质组磷酸化的分析需要包括磷酸化肽段提取技术、磷 酸肽的鉴定技术等多种技术的整合。 我们发展了一种具有自主知识产权的基于钛 离子的固定亲和色谱（Ti(IV)-IMAC）的磷酸肽富集技术，比常规富集技术能鉴 定更多的磷酸肽；在磷酸肽鉴定的数据处理方面，发展了一种结合二级和三谱高 可信鉴定磷酸肽的方法，开发了一个磷酸化蛋白质组分析专用的软件。为了能够 规模化分析，还需要对复杂组学样品进行有效分级。我们因此发展了一种具有高 正交性质的反相色谱(RPRP-LC)技术用于磷酸肽的多维分离。将Ti(IV)-IMAC富集 技术、RPRP-LC多维分离技术和磷酸肽鉴定的数据处理技术与平台结合起来，可 以组成一个具有鉴定上万个磷酸化位点的蛋白质组磷酸化规模化分析的平台。 4．完善并采用重甲基SILAC技术进行蛋白质组的甲基化分析。