1．聚酰胺柱色谱–酚羟基

聚酰胺的吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小，规律如下：

⑴ 苷元相同，洗脱先后顺序一般是：叁糖苷、双糖苷、单糖苷、苷元。

⑵ 母核上增加羟基，洗脱速度即相应减慢。

⑶ 不同类型黄酮类化合物，先后顺序一般是：异黄酮、二氢黄酮、黄酮、黄酮醇。

⑷ 分子芳香核共轭双键多者易被吸附，故查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。

2．醋酸铅沉淀法–邻二酚羟基

有邻二酚羟基的成分可被醋酸铅沉淀，不具有邻二酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀，据此可将两类成分分离。

3．硼酸络合法–邻二酚羟基

具有邻二酚羟基的黄酮苷元可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此可与不具上述结构的黄酮苷元类化合物用萃取法分离。

关于黄酮化合物提取分离方法。考点1。苷与苷元分离–利用溶解性（也可以用聚酰胺色谱法）。2。酸性不同分离–PH梯度法；3。邻二酚羟基分离–铅盐法、硼酸络合法；4。羟基数目不同分离–聚酰胺色谱法。考试中常将以上混合在一起要求设计提取分离方法。

第四节 色谱检识

色谱法在黄酮类化合物鉴别中主要应用纸色谱（PC）、硅胶薄层色谱及聚酰胺薄层色谱

第五节 结构测定

黄酮类化合物的结构测定是本章的重点及难点，考试时主要有选择题和结构解析题形式，选择题主要是一些规律性的东西，需要记忆；而结构解析要求能熟练运用光谱知识，因此比较难。

紫外光谱

首先要熟记各黄酮类型化合物在甲醇溶液中的UV光谱特征，以此确定结构类型：

表4 黄酮类化合物的甲醇溶液的UV光谱

用甲醇光谱确定母核类型后，加入各种诊断试剂进一步得到取代基的信息。常用的诊断试剂有甲醇钠（NaOMe）、醋酸钠(NaOAc)、醋酸钠-硼酸(NaOAc-H3BO3 )、三氯化铝(AlCl3)、三氯化铝-盐酸(AlCl3-HCl)等。加入诊断试剂后黄酮及黄酮醇类化合物的紫外光谱位移及其结构特征归属见表5。

表5 加入诊断试剂的黄酮及黄酮醇类化合物UV图谱及结构特征的归属