细菌发酵L乳酸的研究

自ｌＩ菌发酵Ｌ（＋）一乳酸的ｉｌ：ｌ『究裁；

诱变后观察挑选到的诱变菌株菌落形态的变化；取少许进行革兰氏染色。由

于突变菌株与出发菌株相比，在菌落、菌体个体形态上均看不出明显的变化，因此鉴定其在对营养的要求上是否发生了变化。乳酸菌不能合成一种或几种微量的有机化合物，必需由外界提供才能很好的进行生长和繁殖。由于乳酸菌所具有的酶系比较单纯，缺乏对许多有机物的合成能力，故有人将乳酸菌看成为丧失一系列能力的代谢残废者【”１。没有一种乳酸菌能在仅含有葡萄糖和铵盐的纯矿物盐培养基上生长，它们大多需要某些维生素和氨基酸，嘌呤，嘧啶及其衍生物（需要

量约为１０～２０

ｕ

ｇ／ｍＥ）等生长辅助因子。维生素包括核黄素Ｂ２，吡哆醇Ｂ６，Ｂ‰

生物素（Ｈ）、叶酸Ｂ…尼克酸、泛酸等。生物素在羧基化及脱羧化反应中起辅酶

作用：四氢叶酸是传递一碳单位的辅酶；ＮＡＤ、ＮＡＤＰ的前体是许多脱氢酶的辅酶：泛酸组成ＣｏＡ，与脂肪酸代谢和糖代谢有关；磷酸吡哆醛是转氨酶和氨基

酸脱羧酶的辅酶（所以当培养基中含有微生物羧需要的氨基酸时，就不需要Ｂ６）；

核黄素Ｂ２构成辅酶ＦＭＮ＆ＦＡＤ，是许多脱氢酶的辅酶；硫胺酸性Ｂｌ是硫胺素焦磷酸脱羧酶、醛醇酶和转酮醇酶的辅基。氨基酸是组成蛋白质和酶的结构物质不同乳酸菌需要的氨基酸种类不同，需要量一般大于维生素【２吼”Ｊ。

１．３．３培养基的优化‘４卜５０】

通常优化发酵培养基的方法使单次单因子法。但由于考察因素间经常存在交

互作用，使得该方法并非总能获得最佳的优化条件。另外，当考察的因素较多时，需要太多的实验次数和较长的实验周期。对乳酸菌培养基优化是多因素多水平实验设计。这是因为乳酸菌属于化能异养型微生物，其营养要求复杂，除了需要可发酵性碳水化合物外，还必须提供氨基酸，维生素等多种生长因子，乳酸菌才能

正常生长。若采用常规的正交实验设计，实验次数为ｎ２（水平数）工作量很大。于是人们对多因素多水平的实验多采用均匀设计，其实验次数为ｎ，分散性很强，冒尖性也很好，但没有正交实验的整齐可比性，不能进行方差分析，优化效率不如工Ｆ交实验。对乳酸菌培养基配方的确定单靠正交试验或均匀设计是不可能得到一个非常好的培养基配方的。

本文采用的是ＳＡＳ（ＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｓｔｅｍ）软件中二水平设计（Ｔｗｏ

Ｌｅｖｅｌ

Ｄｅｓｉｇｎ）和响应面分析法（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ

Ｓｕｒｆａｃｅ

Ａｎａｌｙｓｉｓ，ＲＳＡ）结合的实验设计。