细菌发酵L乳酸的研究

细菌发酵Ｌ（＋） 乳酸的研究

树料与力法

准确度低；ｕｖ酶法精度高，但测定时间长；用气相色谱法，样品需要经过衍生处理后才能检测１：而液相色谱法可以直接测定ｆ６¨。采用反相高效液相色谱法分析乳酸发酵液中的乳酸，测定速度快，重现性好，准确度高。（１）滴定法

（ａ）不加ＣａＣ０３的发酵液中乳酸的测定：

取ｌｍＬ发酵液，用０．１ｌＩＭ的ＮａＯＨ滴定，酚酞指示剂指示终点，每消耗ｌｍＬ的ＮａＯＨ相当于ｌ％的乳酸。

（ｂ）加ＣａＣ０３的发酵液中乳酸的测定

ＥＤＴＡ滴定法【３６ｌ：取乳酸发酵液，离心后获得清液，精确吸取ｌｍＬ上清液于２５０ｍＬ三角瓶中，加水１００ｍＬ，加ＮａＯＨｌ５ｍＬ与钙红指示剂约Ｏ．１９，用Ｏ．０５ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ溶液滴定，溶液由紫红色变为纯兰色，即为终点。每消耗１ｍＬ的ＥＤＴＡ相当于Ｏ．９１％孚Ｌ酸。

（２）反相高压液相色谱法㈣

配制１．０００％的Ｌ（＋）哥Ｌ酸标准溶液，用外标法测定经过离心、适当稀释后的发酵液。

①分析仪器及色谱条件：仪器：Ｗａｔｅｒｓ

６００Ｅ

９９６ＰＤＡ

色谱柱：）（ｔｅｒｒａＲＰｌ８５

ｕ

１５０ｘ３．９ｍｍ

流动相：水（ＫＨ２Ｐ０４

Ｏ．０５Ｍ

ｐＨ２２）：

流速：ｌｍＬ／ｍｉｎ

检测波长：２１０ｎｍ进样量：１０．００ｕｌ

②样品处理：将发酵液离心去除菌体和ＣａＣ０３沉淀，将上清液稀释１０倍为

待测液

③标准溶液配制：准确称取１９乳酸标准品放入１００ｍＬ容量瓶中，用超纯水溶解并定容配成乳酸标准液。④液相色谱分析

定性：相同色谱条件下，将样品色谱图与乳酸标准液色谱图进行对照，根据保

留时间确定样品中的乳酸。