第五章 酶类药物(5)

① 酶的结晶方法 酶的结晶方法主要是缓慢地改变酶蛋白的溶解度，使其略处于过饱和状态。 盐析法：操作要在低温下进行，加盐，缓冲液pH要接近酶的等电点。多数酶就可形成结晶。有时也可交替置在4℃冰箱中和室温下来形成结晶。

有机溶剂法：一般要含少量无机盐的情况下，选择使酶稳定的pH，缓慢地滴加有机溶剂 。使用的缓冲液一般不用磷酸盐，而用氯化物或乙酸盐。

复合结晶法：有时可以利用某些酶与有机化合物或金属离子形成复合物或盐的性质来结晶。

透析平衡法、等电点法

② 结晶条件的选择

酶液的纯度：酶的纯度越高，结晶越容易，长成大的单晶可能性也越大。结晶对酶有明显的纯化

作用。

酶的浓度

温度：结晶的温度通常在4℃下或室温25℃下，低温条件下酶不仅溶解度低，而且不易变性。 时间：结晶形成的时间,数小时到几个月，有的甚至需要1年或更长时间。一般来说，较大而性能

好的结晶是在生长慢的情况下得到的。一般希望使微晶的形成快些，然后慢慢地改变沉淀条件，再使微晶慢慢长大。

pH:

晶种：不易结晶的蛋白质和酶，有的需加入微量的晶种才能结晶

结晶器皿处理：结晶用的器皿要充分清洗、烘干。使用前用结晶母液再冲洗一次。 结晶的玻璃

器皿，可用硅涂料进行表面处理，以使表面光滑且不润湿。这样可减少晶核数目 ，形成大的结晶。

（5）酶分离和纯化中应注意的问题

① 防止酶蛋白变性

② 防止辅助因子流失

③ 防止酶被蛋白水解酶降解

第三节 重要酶类药物

一、胃蛋白酶

广泛存在哺乳动物、鸟类、爬虫类及鱼类的胃液中，以酶原的方式存在于胃底的细胞里。

（一）化学组成与性质

药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物，含有胃蛋白酶、组织蛋白酶、胶原酶等，为粗制的酶制剂。水溶液呈酸性，难溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。

pI为pH1.0，最适pH1.5～2.0。可溶于70％乙醇和pH4的20％乙醇中。

胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物。