第五章 酶类药物(3)

③稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体；

④能利用廉价的原料，发酵周期短，易于培养。

（2）获取优良菌株有三种途径：

①从自然界分离筛选。自然界是产酶菌种的主要来源，筛选产酶菌的方法与其他发酵微生物的筛选方法疾病一致，包括菌样采集、菌种的分离与初筛、纯化、复筛和生产性能鉴定等步骤。

②用物理或化学方法处理、诱变。X射线照射等等。

③用基因重组与细胞融合技术，构建性能优良的工程菌。同源重组等。

2、生物酶制剂的生产发酵技术

（1）培养基组成

碳源、氮源、无机盐、生长因子和产酶促进剂

（2）培养方式：

固体培养：固体培养法亦称麸曲培养法 ，该法是利用麸皮或米糠为主要原料，另外视需要添加其它谷糠、豆饼等，加水拌成含水适度的半固态物料作为培养基 。

液体培养：液体培养法是利用液体培养进行微生物的生长繁殖和产酶。根据通气（供氧）方法的不同，又分为液体表面培养和液体深层培养两种。

3、影响酶产量的因素

（1）温度：一般发酵温度比种子培养时略高些，这样对产酶有利。

（2）发酵的pH：可用糖或淀粉调节，pH低则可用氨来调节。一般pH值为4-6.

（3）通气：（供氧）临界氧浓度 。氧必须是溶解于培养基中的氧 。

（4）搅拌：增加液体湍流速度 ，减少气泡周围液膜厚度 。有利于促进细胞的新陈代谢。

（5）和消泡剂：发酵过程中，由于发酵液受到强烈的通气搅拌，培养基中某些成分的变化及代谢中产生气体，会形成较多的泡沫，而且气泡不易消失，是由于培养基中蛋白质分子排在气泡表面形成一层吸附膜，聚集成泡沫层之故。

消泡剂：天然油类，醇类，脂肪酸类，胺类，酰胺类，磷酸酯类，金属皂类，聚硅氧烷等。

（6添加诱导剂和抑制剂：诱导酶诱导酶的合成，诱导酶是该酶作用底物或者是其类似物。抑制剂促进酶的形成 。加入适量表面活性剂 。

二、酶类药物的提取和纯化

1、酶的提取

（1）水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取，经过预处理的原料，包括组织糜，匀浆，细胞颗粒，丙酮粉都可用水溶液抽提。

水溶液的pH选择对抽提具有影响，应考虑的因素有：