第五章 酶类药物(4)

① 酶的稳定性

② 酶的溶解性

③ 酶与其他物质结合的性质

④ 选择pH的总原则是，在酶稳定的pH范围内，选择偏离等电点的适当的pH。

（2）有机溶剂法 某些结合酶，由于和脂质结合牢固，需用有机溶剂除去脂质，且不能使酶变性。常用有机溶剂是丁醇。

① 丁醇性质：亲脂性强、兼具亲水性、在脂与水分子间能起表面活性剂的桥梁作用。

② 丁醇提取方法：均相法和两相法

（3）表面活性剂法表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，故可用于提取结合酶。

2、酶的纯化

不同的酶，因性质不同，其纯化工艺可能有很大不同。

评价一个纯化工艺好坏，主要看两个指标：酶比活和总活力回收率。

纯化过程中的技术难点：

（1）杂质的除去酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的杂蛋白、多糖、脂类和核酸等 。

① 调pH和加热沉淀法

② 蛋白质表面变性法利用蛋白质表面变性性质的差别，也可除去杂蛋白，加入氯仿和乙醇进行震荡，

可以除去杂蛋白。

③ 选择性变性法利用蛋白质稳定性的不同，除去杂蛋白。

④ 降解或沉淀核苷酸法用核酸酶，将核酸降解成核苷酸，使粘度下降便于离心分离。用核酸沉淀剂

如三甲基十六烷基溴化铵、硫酸链霉素、聚乙烯亚胺、鱼精蛋白和二氯化锰等

⑤ 利用结合底物保护法除去杂蛋白酶和底物结合或竞争性抑制剂结合后，热稳定性大大提高，这样

就可用加热法除去杂蛋白。

（2）脱盐

① 透析

② 凝胶过滤

（3）浓缩

① 冷冻干燥法

② 离子交换法

③ 超滤法

④ 凝胶吸水法

（4）酶的结晶