转基因大豆 ELISA方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®)3 

引言

本章介绍一种用免疫学技术检测转基因植物的方法，这种方法是基于对转化事件中转入基因产生的新蛋白的检测。但是，值得注意的是，基因修饰并不总是直接特异地对应于产生新蛋白，蛋白表达量水平也并不总是足够用于检测的目的。另外，某些蛋白可能仅在植物的特定部位表达 (如：组织特异性启动子)，或者在不同部位或不同生理时期其表达量水平也不一样。

有报道称植物中转基因产物表达量水平占总可溶性蛋白的0~2%，甚至在一些强启动子植物中也是如此 (Longstaff，1995)。然而，在许多情况下，文献资料报道的转入基因蛋白表达量水平 (如：批准的GM作物) 一般低于2%的表达上限 (henner，1997)。

免疫学分析是一种用抗体作为检测试剂的分析测定系统。抗体是一种从动物血清中分离得到的特异性蛋白，它可特异性地结合于诱导它们产物的底物，即抗原。抗体的制备是通过将待检测的底物 (如：CP4 EPSPS，是一种产生农达除草剂抗性的蛋白) 注射到动物如兔子或者老鼠体内，然后动物体内的细胞会将此底物识别为外来物质并产生抗体与之对抗。抗体经过纯化，并用可检测的标记与之连接，然后可作为检测目标底物的试剂。

免疫学检测方法发展和应用的先决条件是：得到可直接和待检测新蛋白作用的高特异性抗体。另外，目标样品或蛋白不能有明显的降解。

在对复杂基质中的抗原进行定量的检测中，抗体是一个很有用的生物学工具。所有的免疫学分析都是基于抗原和抗体之间的特异性结合。

抗体-抗原相互作用

当免疫学家将抗体的本质确定为蛋白质时，对于抗体的大多数描述都包括：这些分子具有将抗原从溶液中沉淀出来的能力，尽管现在抗体沉淀性质已经很少用于实验性分离和检测抗原，除了在一些自身免疫疾病中抗体也很少在体内沉淀抗原。抗体沉淀反应的作用，如图1所示，地说明了抗体分子基本和普遍的特性。这个实验同时说明了其他的一些问题：

·血清抗体 (IgG) 在与抗原反应时是二价的，它与抗原可以发生交联 (cross-link)； ·抗原与抗体反应时一般是多价的；

食品中转基因成分检测 第12章