转基因大豆 ELISA方法定量检测抗农达® (Roundup Ready®)12 

·大豆分析缓冲液，磷酸盐缓冲液 (PBS)，Tween 20，牛血清蛋白 (BSA)，pH 7.4 ·包被有单克隆捕获抗体的酶标板

·大豆偶联抗体，冻干的兔抗CP4 EPSPS蛋白

·大豆偶联抗体稀释液，10％热灭活的小鼠血清

·显色底物，K-BlueTM，四甲基联苯胺 (tetramethylbenzidine，TMB)，过氧化氢，5%二甲基甲酰胺 (dimethylformamide) 作为溶剂。

·终止液，0.5%硫酸

·10倍浓缩的洗脱缓冲液，PBS，Tween 20，pH 7.1。

·阴性和阳性参照标准

程序

程序的使用范围

ELISA-GM检测体系只限于检测CP4 EPSPS蛋白表达与参照标准中GM材料含量相关的样品。

ELISA检测试剂盒最适操作环境温度在15~30℃之间。参照标准的最高吸光值应当高于0.8，吸光值不能落在分光光度计的线性范围以外 (不同的分光光度计有不同的线性上限)。应该考虑到吸光值 (OD) 在30℃以上会很快上升，因此，如果温度较高，就应该降低底物温育时间。而在温度较低时 (低于15℃)，应该加长底物温育时间。

样品制备过程中避免污染的方法

概述. ELISA GMO检测体系具有很高的灵敏度，非常少量的GM污染都会影响检测的结果。因此不同批次样品处理操作中必须对过程中使用的所有仪器进行彻底的清洗。以下程序包括：第一步尽量去除颗粒物质，第二步乙醇清洗，可使样品变性，这样可使留在仪器上的任何可检测的GM蛋白失去活性。 混合器或搅拌机清洗. 使用柔软的毛刷清洗。定期地清洗毛刷并在酒精中浸泡。使用之前将毛刷晾干。用柔软的衣物或实验室毛巾拭擦。

食品中转基因成分检测 第12章