农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体(7)

5期李丹丹等：农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体系优化795

2.42.4.1

转基因植株对草铵膦的抗性检测

叶片针刺法和涂抹法草铵膦适宜筛选浓度使用两种方法对非转基因大豆进行草铵膦

B），最后直至整个叶片死亡脱落，严重时出现植株

C）。使用针刺法草铵膦茎尖枯焦死亡的现象（图5，

涂抹法草铵膦浓度为200mg/L浓度为150mg/L、

时，均出现叶片全部枯焦脱落、植株茎尖枯焦死亡的现象，从而确定150mg/L和200mg/L分别为针刺法和涂抹法的最适筛选初浓度

。

的确定

处理时都出现随着天数增加施用草铵膦的叶片逐渐

但7d后随着草铵膦浓度的增褪绿甚至枯焦的现象，

A和加，叶片的枯焦面积和程度也越来越大（图5，

图5

Fig.5

叶片针刺和涂抹草铵膦筛选的适宜浓度试验

Testoftheappropriateconcentrationsofglufosinatetoscreenplantswithglufosinateinjectedandpaintedonleaves

A：不同浓度草铵膦针刺法筛选7d后的叶片情况；B：不同浓度草铵膦涂抹法筛选7d后的叶片情况；

C：针刺法和涂抹法筛选7d后植株茎尖死亡的情况

A：Leafsympromsfor7dafterinjectingdifferentconcentrationofglufosinate；B：Leafsympromsfor7dafterpaintingdifferent

concentrationofglufosinate；C：Deathofstemtipafter7dinjectingandpaintingglufosinate

2.4.2叶片针刺法和涂抹法筛选效率的比较分

别用这两种方法在最适筛选浓度下对转化再生植株

进行筛选（图6）。针刺法获得Bar基因PCR植株

筛选效率为27.2%；涂抹法获得Bar基因为49株，

PCR植株为12株，筛选效率仅为9.1%，从而确定针刺法是适合此转化体系的有效筛选方法

。

图6

Fig.6

针刺法和涂抹法对转化再生植株的筛选

Thetransformedregeneratedplantsscreenedbyglufosinateinjectedandpaintedonleaves

A：针刺法筛选转化再生植株阴性叶片；B：针刺法筛选转化再生植株阳性叶片；C：涂抹法筛选转化再生植株阴性叶片；

D：涂抹法筛选转化再生植株阳性叶片；E：针刺法和涂抹法筛选转化再生植株茎尖对比（左：阳性；右：阴性）A：Leafsympromofnegativetransformedplantsscreenedbyinjectingglufosinate；B：Leafsympromofpossitivetransformedplantsscreenedbyinjectingglufosinate；C：Leafsympromofnegativetransformedplantsscreenedbypaintingglufosinate；

D：Leafsympromofpossitivetransformedplantsscreenedbypaintingglufosinate；E：Comparisonofthestemtipof

transformedplantsafterinjectingandpaintingglufosinationonleaves（left：positive；right：negative）