农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体

13（5）：789-797植物遗传资源学报2012，

JournalofPlantGeneticResources

农杆菌介导的大豆子叶节非组织

培养遗传转化体系优化

李丹丹，张

洁，刘

娜，陈

琰，韩胜芳，王冬梅

（河北农业大学生命科学学院，保定071001）

摘要：本研究以GUS基因在子叶节区的瞬时表达为依据，通过探讨影响农杆菌转化效率的因素，优化了大豆子叶节非组织培养遗传转化体系；利用该体系对冀豆16号进行Bar基因的遗传转化，并使用针刺法对转基因植株进行草铵膦筛选。结果OD600=0.6、77、表明，侵染液中附加3%蔗糖、以脱脂棉作为菌液附着介质同时不添加表面活性剂SilwetL-侵染1次的GUS阳PCR鉴定共获转化率为2.5%。经PCR和RT-性率最高达到62.13%。草铵膦抗性植株经PCR检测获得T0阳性植株10个，得3株T1阳性植株，初步证明目的基因已整合到大豆基因组中。

关键词：大豆；子叶节；非组织培养；遗传转化；草铵膦筛选

OptimizationoftheAgrobacterium-MediatedGeneticTransformation

SystemofSoybeanCotyledonaryNodeWithNonTissue-Culture

LIDan-dan，ZHANGJie，LIUNa，CHENYan，HANSheng-fang，WANGDong-mei

（CollegeofLifeSciences，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001）

Abstract：ByinvestigatingthefactorsinfluencingthetransformationefficiencyofAgrobacterium，agenetictransformationsystemofsoybeancotyledonarynodewithnontissue-culturewasoptimizedusingthetransientexpres-sionofGUSintheregionofcotyledonarynode．GeneBarwastransformedintosoybeanJidou16，andthetransgenicplantswerescreenedbyglufosinateinjectedonleaves．Theresultsindicatedthatinfectionmediumcontains3%sug-ar，OD600=0.6，noneSilwetL-77withtheabsorbentcottonasattachedmediaandthehighestpercentageofGUSpositivewas62.13%byonetime．Weobtained10positiveplantsinT0generationafterdetectedthetransgenicplantsresistanttoglufosinatebyPCR．Thetransformationefficiencywas2.5%．ThreepositiveplantsofT1genera-tionwereobtainedbyPCRandRT-PCR，whichdemonstratedthatthetargetgenewasintegratedintothesoybeangenome．

Keywords：Soybean；Cotyledonarynode；Nontissue-culture；Genetictransformation；Glufosinatescreening大豆是全球重要的经济作物，是食用油和蛋白［1-2］

。利用分子育种的方法可以提的主要作物来源

高大豆的产量及品质。目前，在大豆的遗传转化中

［3］［4］

常用的方法主要有农杆菌介导法和基因枪法，

［5］

而农杆菌介导法中又以子叶节法最为常用。子

外植体获得不受季节叶节转化体系具有操作简便、

叶节遗传转化体系仍存在着组织培养过程中茎伸长

因此尝试建立一个非组织培养的和生根难的问题，

子叶节遗传转化体系是解决上述问题的有效途径。王全伟等

以大豆幼苗的顶端生长点和叶腋生长

——注射点为靶点，通过农杆菌介导的整体转化法—

［7］

限制、操作周期较短等特点

10-10收稿日期：2011-

［6］

。但农杆菌介导的子

最终获法进行转录因子DREBIC基因的遗传转化，

得1株阳性植株。该方法克服了大豆组织培养再生

12-09修回日期：2011-

1）；转基因生物新品种培育重大专项子课题（2008ZX08004-002-1-5；2009ZX08004-001B；基金项目：河北省科技攻关计划项目（042401116D-2011ZX08004-002-002）

mail：lidandan.123．xue@163．com作者简介：李丹丹，硕士研究生，研究方向为植物抗逆生理及遗传转化。E-张洁，博士研究生，副教授，并列为第一作者。

mail：dongmeiwang63@126．com通讯作者：王冬梅，博士，教授，博士生导师，主要从事植物逆境分子细胞生物学领域的研究工作。E-