人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

EADC值改变。

2.b=800 s/mm2时，肿瘤ADC值与EADC值改变

3.EADC图上显示肿瘤坏死情况单纯rAd/P53治疗后肿瘤在EADC图上的坏死范围(b=1000)较对照组增加，各时间点W统计量与p值依时间递增分别为20，0.1508；17，0.0317；15，0.0079；16，0.0159；22，0.3095。

(二)1H-MRSWilcoxon检验，24h：Cho/Cr面积比较对照组减少，19=0.008；G1xβ～γ/Cr面积比较对照组减少，p=0.0130。48h：Lip峰高较对照组增加，p=0.0143，面积较对照组增加，p=0.0419。72h：G1xβ～γ/Cr面积比较对照组减少，p=0.0412。120h：G1xβ～γ/Cr面积比较对照组减少，p=0.0309；G1xα/Cr面积比较对照组减少，p=0.0027。168h：G1xβ～γ/Cr面积比较对照组减少，p=0.0014；G1xα/Cr面积比较对照组减少，p=0.0121。 结论：

rAd/p53单独、联合化疗或与碘油乳液配伍治疗人类结肠癌SW480荷瘤裸鼠模型，肿瘤内p53表达明显增加，肿瘤坏死、凋亡范围增加，有抗癌效果。5-FU可上调p53表达，碘油使p53表达峰值提前，表达量明显增加，说明两者均有增加p53抗瘤性作用，而碘油有可能对腺病毒包装的p53起到了航空母舰的运载效果。

rAd/p53用药1d-3d肿瘤细胞KI不同程度增加，可见增加肿瘤细胞的增值活性是rAd/p53增加肿瘤细胞对放、化疗的敏感性的机制之一，在用药早期效果尤为明显，5-FU与rAd/p53有协同作用。

ADC值和EADC值在治疗后24h即可出现有统计意义的改变，可作为单纯rAd/p53、或联合化疗治疗肿瘤早期疗效评价的生物标记物。但碘油可能因为对肿瘤内水分子扩散的影响，ADC值、EADC值的早期改变较复杂，难于反应肿瘤的治疗效果。

1H-MRS可检测多个代谢物，肿瘤治疗早期Cho/Cr、G1xα峰/Cr与G1xβ～γ峰/Cr面积比出现降低，Lip出现增加，与肿瘤细胞的凋亡相关，可作为肿瘤治疗早期疗效评价的生物标志物。

6.期刊论文 余昌勇.罗和生.YU Chang-yong.LUO He-sheng NS-398对鼠结肠癌抑制作用的研究 -临床消化病杂志2010,22(2)

目的 观察选择性COX-2抑制剂NS-398对鼠实验性结肠癌的防治作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用1,2-二甲肼(DMH)+右旋葡聚糖苷钠(DSS)诱导大鼠结肠癌.实验分3组:对照组、奥沙利铂干预组及NS-398干预组,观察各组大鼠结肠异常增生隐窝灶(ACF)数量及结肠癌的发生率并检测肿瘤组织微血管密度(MVD).结果 (1)干预组诱导出ACF数量及结肠癌发生率明显低于对照组(P＜0.05).(2)干预组瘤组织中MVD较对照组明显减少(P＜0.05).结论(1)COX-2抑制剂NS-398可以通过阻断肿瘤血管形成,达到抑制大鼠结肠肿瘤形成的目的 .(2)NS-398抗鼠结肠癌作用与化疗药物奥沙利铂相当.

7.学位论文 秦海燕 鼠尾草和胡椒薄荷叶提取物清除自由基、抗氧化及抗HCT-8结肠癌细胞的作用研究 2006

近年来从自然界寻求天然抗氧化剂的研究已引起各国科学家的高度重视。目前，世界各国开发了大量天然抗氧化剂产品，受到人们的普遍欢迎。其中，芳香植物提取物抗氧化作用深受关注，但关注焦点主要集中在芳香植物精油上，对芳香植物非精油组分清除自由基、抗氧化作用及对癌细胞的作用研究甚少，且主要集中于薰衣草、迷迭香等几种知名芳香植物。

本研究选取鼠尾草和胡椒薄荷的干燥叶片，分别用水、甲醇和乙酸乙酯提取法提取，以这些提取物为实验材料，采用六种生物化学发光法和两种分光光度法，较系统地检测了鼠尾草和胡椒薄荷叶提取物清除活性氧(ROS)、活性氮(RNS)和活性碳(RNC)、抗脂质过氧化及对DNA损伤保护的作用。并以体外培养的HCT-8结肠癌细胞为实验材料，检测鼠尾草和胡椒薄荷叶水提物、醇提物对HCT-8结肠癌细胞内源性超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性，以及对还原型谷胱苷肽(GSH)、丙二醛(MDA)和过氧亚硝基(ONOO-)浓度的影响，并通过MTT法和流式细胞仪检测鼠尾草和胡椒薄荷叶水提物、醇提物对HCT-8结肠癌细胞生长的影响。

抗氧化实验结果表明：鼠尾草和胡椒薄荷叶提取物不但能直接清除超氧阴离子自由基(O-2)，而且能通过抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)的活性而减少O-2的产生；也能有效地清除羟自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)、二苯代苦味肼基自由基(DPPH.)、ONOO-和碳酸自由基(CO-.3)。结果还显示，鼠尾草和胡椒薄荷叶提取物均能抑制脂质过氧化，明显()抑制和延缓DNA损伤，起到预防型抗氧化剂和断链型抗氧化剂的双重作用。

细胞学实验结果表明：鼠尾草和胡椒薄荷叶水提物、醇提物可抑制HCT-8结肠癌细胞的增殖并改变其细胞周期，也可剂量依赖性地提高HCT-8结肠癌细胞内源性SOD活性及GSH水平，降低细胞内CAT活性，改变细胞内外的ONOO-和MDA的浓度，并在一定程度上促进细胞凋亡，提示这些变化与提取物能改变细胞内的一些抗氧化状态有关。

本研究也检测了鼠尾草和胡椒薄荷叶提取物的组分，发现水提取物、醇提取物和乙酸乙酯提取物都含有一定量的黄酮类和酚类物质，且发现六种提取物抗氧化能力强弱与其黄酮类化合物含量多少有一定的相关性，提示黄酮类化合物是其抗氧化的有效成分之一。

由上可知，本研究是自由基生物学和植物资源学的交叉和渗透，所得结果对进一步开发芳香植物资源特别是拓展其医疗和营养保健等方面的功能具有重要的理论价值和应用前景。

8.学位论文 夏国盛 几种药物代谢相关蛋白基因在结肠癌细胞中的表达与化疗敏感性的相关性 2009

目的：

本研究首先通过检测5种不同结肠癌细胞株中TS、TP、GST-π、pgp、MRP1等药物代谢相关基因的mRNA和蛋白表达水平的差异，结合5-FU、L-OHP的体外药敏实验，探讨TS、TP、GST-π、pgp、MRP1表达水平与5-FU、L-OHP化疗敏感的相关性，从中分析耐药细胞株中药物代谢相关基因表达谱，为临床开展耐药指标筛查指导结肠癌个体化化疗提供依据。

同时，分别通过无血清培养基（Serumfreemedium，SFM）悬浮培养和免疫磁珠分选技术（Magnetic-activatedcellsorting，MACS）从普通SW480细胞中获取结肠癌干细胞（coloncancerstemcell，CSC），比较结肠癌干细胞及其亚群和普通SW480中耐药相关基因的表达水平差异，初步探索结肠癌干细胞的耐药机制。 材料和方法：

1、主要材料：人结肠癌活检标本，人结肠癌细胞株SW1116、sw480、Lovo、HT-29、HCT116，鼠抗人TS单克隆抗体、鼠抗人TP单克隆抗体、鼠抗GST-π单克隆抗体，鼠抗人Mdr-1单克隆抗体，鼠抗人MRP1单克隆抗体，总RNA提取试剂盒，引物，5-FU，L-OHP；DMEM/F12培养基，表皮生长因子（EGF），碱性成纤维生长因子（bFGF），B27添加剂，CD44+干细胞免疫磁珠分离试剂盒，CD166+干细胞免疫磁珠分离试剂盒。 2、方法：

2．1免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

通过内镜活检钳取结肠腺癌组织标本，常规福尔马林固定，石蜡包埋、病理切片，经过烤片、二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，根据不同抗体的要求进行相应抗原修复；PBS冲洗后滴加3%H2O2孵育10分钟阻断内源性过氧化物酶；再次PBS冲洗，滴加特异性小鼠抗人单克隆一抗，4℃孵育过夜；PBS冲洗后滴加山羊抗小鼠IgG抗体-HRP多聚体，室温孵育30分钟；PBS冲洗后DAB染色30秒，苏木素复染，1%盐酸酒精分化、自来水冲洗返蓝，最后进行脱水、透明、封片。

2．2细胞培养（cellculture）

结肠腺癌细胞株SW1116、sw480、Lovo、HT-29、HCT116由我科实验室常规保种，复苏后加入含10%胎牛血清RPMI1640培养液，接种至25c㎡培养瓶中，放入5%CO237℃恒温培养箱培养。

2．3免疫印迹分析（Westernblottinganalysis，WB）

RIPA裂解液加入贴壁培养细胞冰上裂解培养细胞30min，每5分钟使用超声粉碎仪粉碎一次，4℃20000g离心30min后取上清获取总蛋白。采用BCA法测定总蛋白浓度，加入5XSDS蛋白上样缓冲液95℃变性5min。配胶后每孔上样50ug，SDS-PAGE凝胶电泳，根据目的蛋白分子大小不同使用2mA/c㎡转膜。5%脱脂奶粉37℃封闭1h，加入稀释好的小鼠抗人一抗TS（1：300），PD-ECGF（1：400），GST-P1（1：500），Pgp（1：200），MRP1（1：200）4℃孵育过夜。TBST洗膜5分钟×3次后加入山羊抗小鼠二抗（1：3000）37℃孵育1h。洗膜后加入ECL发光试剂盒发光，曝光、显影、定影后进行摄影，图象分析。

2．4免疫细胞化学（Immunocytochemistry，ICC）

细胞贴壁生长于盖玻片，使用4%多聚甲醛进行固定，0．2%Triton/0．01MPBS透膜后采用Maxvision二步法免疫组化检测系统进行染色。 2．5WST-8分光光度法（WST-8colorimetricassay，CCK8）体外药敏实验

抗肿瘤药物氟尿嘧啶、奥沙利铂梯度稀释溶解于RPMI1640培养基，加入到96孔板贴壁培养4h的SW1116、SW480、LOVO、HT-29、HCT116细胞中孵育作用48小时，加入WST-8（2-（2-methoxy-4-nitrophenyl）-3-（4-nitrophenyl）-5-（2，4-disulfophenyl）-2H-tetrazolium，monosodiumsalt）溶液处理1小时，采用酶标仪检测不同药物浓度处理的细胞在450nm波长的光密度（OD450）。不同药物浓度处理细胞的OD450与对照处理细胞OD450比值即为化