人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立(2)

：；2；；!"%&’(,-.-2,$2,%#47%50,%-#"*-"-0,"#$2!.$2"$"0-2,%.%,-/0199#$三十年代以来，国内结肠癌的发生率逐年升高，结肠癌晚期患者预后差，长期存活率低。为深入研究结肠癌的发生机制以及寻找有效地抑制肿瘤生长的药物，以往研究较多的是人结肠癌皮下移植瘤动物模型，而国内研究人结肠癌的原位移植瘤模型较）腹腔注射麻醉，常规消毒皮肤，选择下腹正中切U&

口，打开腹腔，找到盲肠拉出，在距离盲肠末端:,5处肠系膜侧的浆膜面，用手术刀轻轻刮伤浆膜层，然后用S8H无损伤尼龙线和圆针将已制备好的新鲜瘤块，每只裸鼠用一块“”字全层透壁包埋缝合在损S少，本实验通过建立裸鼠人结肠癌的原位移植瘤模型，以模拟人类结肠肿瘤的临床条件，并观察了不同剂量的塞来昔布（,%.%,-/01）对肿瘤生长的抑制效应。

材料与方法(:材料

(:(:药物来源

塞来昔布（,%.%,-/01

，西乐葆）由西尔大药厂波多黎各分厂生产，普强苏州制药有限公司提供（生产批号;<=)），呈白色粉末状。(:(<动物来源>?@>／A24／24雌性裸鼠，BCD

级，购自中国科学院上海试验动物中心（获合格证书），;!E周龄，重:E!:=&，分笼饲养于屏障系统的洁净层流架内（无特定病原体级），室温控制在（<EF:）G，相对湿度;HI!JHI。(:(KL)8<M肿瘤细胞株购自中国科学院上海细胞生物研究所。

(:(;细胞培养液使用N,A-’

’!E?（购于O0>8-公司）

培养液（含谷氨酰胺和:HI胎牛血清）。(<动物实验方法

(<(:裸鼠原位移植瘤块的制备［:］

使用前述含青链霉素的细胞培养液，于K=G，体积分数为EIP<培养箱中先对L)8<M细胞培养，用乙二铵四乙酸（QR)?）／胰酶混合液消化和传代。再将对数生长期的L)8<M细胞制备成单细胞悬液调整细胞浓

度至ST:H=／5.，H(:I锥虫篮显色!MEI的肿瘤细

胞具有活力，后以H(:5.／只裸鼠，用无菌一次性注射器注入裸鼠右侧腋下皮下，共注射J只，注射前用碘酊局部皮肤消毒，注射完毕连续观察;周，皮下成瘤直径可达:,5左右，成瘤率为:HHI。成瘤后即处死瘤鼠，消毒皮肤，切下瘤块去除坏死部分选用淡黄色或呈鱼肉状瘤组织置于生理盐水中剪成直径<5的瘤块备用。

(<(<裸鼠原位移植瘤模型的制作［:］

万方数据<;只裸鼠术前禁食:<*，以H(EI戊巴比妥钠（KE!EH5&

／伤处，术毕观察无活动性出血后，回纳盲肠入腹腔，最后逐层缝合腹膜（含肌层）及皮肤。术后所有裸鼠暂时分笼饲养直至完全清醒，整个手术过程尽量在切除皮下瘤后:*内完成。术后立即皮下注射生理盐水:!:(E5.以补充水分的丢失，再禁食禁水J*后给予高能量饮食。

(<(K给药均为术后次日给药，<;只裸鼠随机分;组，每组J只。对照组（A组）为纯水，实验组参

考>$27$#4等［<］的方法，

设塞来昔布高剂量组（L组）:EHH995（:(E5&

／5.）、中剂量组（N组）:HHH95（:(H5&／5.）和低剂量组（@组）EHH995（H(E5&

／5.）的浓度，用消毒蒸馏水溶解塞来昔布新鲜配制成溶液，作为裸鼠每日饮水自由摄入。(K结果观察和测定术前及术后开始每=7观察并记录裸鼠的体重，腹部是否可以触及实质性瘤块，以及老鼠的活动和进食情况，术后连续观察;<7处死裸鼠。解剖观察瘤块与周围肠壁的关系及肝脏转移情况。用游标卡尺测量瘤块的长度（$

）和宽度1），按照公式计算肿瘤的近似体积（V）：VW$T1<／。并计算抑瘤率（I）W

［（对照组平均瘤重X治疗组平均瘤重）／对照组平均瘤重］T:HHI。切下部分瘤块，以及外观和用手触有可疑转移的肝脏组织用HI甲醛固定，石蜡包埋，LQ染色光镜观察肿瘤的浸润和转移情况。切下胃、十二指肠并沿纵轴切开观察粘膜有无充血、糜烂、出血及溃疡形成，予:HI甲醛固定，石蜡包埋，LQ染色光镜观察粘膜有无炎症、糜烂、出血和溃疡等病理改变。

(;统计学处理所有数据采用BCBB::(H统计软件分析，以!"H(HE差异有统计学意义。结果

(:整个实验结束时四组未发生一只裸鼠死亡，成瘤率为:HHI。对照组最早在<:7（K周）于下腹部就可触及直径约<!K55质地较硬的结节，;<7实验结束时四组裸鼠下腹部均可扪及肿块，其中K只对照组荷瘤鼠出现行动不便、反应迟缓、眼睛分泌物

:::::::,::A9:（<::<<5: