百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆及序列分析

为一类,而欧洲白桦ACO2(CAA71738)单个聚为一类.这有可能是因为它们本为同一基因家族不同成员,进化结果不一致,因此产生这种差异;也有可能是同一基因诱导方式的不同而形成不同转录本,从而导致蛋白的表达产生差异.其中,天竺葵ACO3(AAB70884)、天竺葵(AAB70883)可能因为上述的原因,二者差异也比较明显.而郁金香可能因为ACO基因不同成员,乙烯生物合成途径相似,尽管有不同的诱导方式,转录途径相似,因此,其不同的基因家族成员同源性比较高.

术逐渐取代前两种技术成为克隆基因全长的常用方法.近年来,RACE成功地应用于基因的分离[12 14],充分显示了其巨大的应用潜力.

本研究采用RACE技术,首次在百合中获得了ACO基因的全长序列,对该序列分析发现,该基因全长1152bp,开放阅读框为954bp,编码318个氨基酸,通过Blastn与Blastp分别进行同源性比对分析,LACO与已报道的植物同源性都在70%以上.聚类分析结果表明,本研究从百合中克隆出来的ACO基因最先与双子叶植物聚类合并,最后才与单子叶植物的兰科植物与禾本科植物聚类合并,这个结果与Blastn与Blastp分别对核苷酸与氨基酸同源性比对所得的结果基本上一致.其结果表明不同物种的ACO基因进化程度不同.

LACO全长的获得,一方面,可以体外表达大量酶蛋白,对其生物性质进行研究;另一方面,还可以构建反义或RNAi载体,转化百合,控制转基因植株的乙烯生成,延长百合切花的瓶插期,达到改良性状的目的.

3 讨 论

cDNA完整序列的获得对基因的结构和蛋白质表达等研究至关重要.5!和3!端的克隆与序列测定是全长基因分析中的关键,通过cDNA文库筛选或者电子克隆获得的基因往往存在5!和3!端不完整或缺失的现象,这为其后期研究基因的结构与蛋白表达带来困难.而RACE技术已经能够克服这些缺点,并很快地得到完整的全长片段.因此,RACE技

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