百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆及序列分析

西北植物学报,2008,28(4):0651-0656ActaBot.Boreal. Occident.Sin.

文章编号:1000 4025(2008)04 0651 06*

百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆及序列分析

刘鲜艳,刘雅莉*,王跃进,张宗勤

(农业部西北园艺植物种质资源与遗传改良重点开放实验室,陕西省农业分子生物学重点实验室,西北农林科技大学园艺学院,陕西杨陵712100)

摘 要:以亚洲百合 Polyanna (Liliumspp.)花瓣为材料,根据已报道的百合ACC氧化酶基因片段设计1对末端扩增特异引物,采用RACE方法,获得百合ACC氧化酶基因的全长cDNA(GenBank登录号为EU296623).该cDNA全长1152bp,具有一个954bp的开放阅读框,编码318个氨基酸.Blast搜索结果显示,百合ACC氧化酶基因核苷酸序列与其它植物已报道的ACC氧化酶基因具有71%~82%的相似性,氨基酸序列有70%~87%的相似性,聚类分析表明,与单子叶植物百合科郁金香首先聚类,其次与双子叶植物聚类,最后与单子叶禾本科和兰科植物聚类.

关键词:ACC氧化酶;cDNA克隆;百合;基因中图分类号:Q785

文献标识码:A

CloningandSequencingFull lengthcDNAEncodingACCOxidaseinLilium

LIUXian yan,LIUYa li*,WANGYue jin,ZHANGZong qin

(KeyLaboratoryofNorthwestHorticulturePlantGermplasmandGeneticImprovementoftheMinistryofAgricultureofChina,KeyLaboratoryforMolecularBiologyofAgricultureofShaanxiProvince,CollegeofHorticulture,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)

Abstract:TotalRNAwasextractedfromLilium Polyanna (Asiatichybrid)withmodifiedSDS/phenolmethod.ThefulllengthACOcDNAofLiliumwasgeneratedviaDNASTARbySplicingthetwosequencesobtainedfrom3!RACEand5!RACEtechnologywithprimersdesignedbasedontheESTsequence(Gen Bankaccessionnumber:DQ062133)thatwereported.LiliumACCoxidasecDNA(GenBankaccessionnumberEU296623)was1152bpinlength.Withinthefull lengthcDNA,aclearopenreadingframe(ORF)was954nucleotides,coding318aminoacids.TheresultsofhomologousanalysisinGenBankdem onstratedthatthesequencehad71%~82%identityonthenucleotidesequenceand70%~87%identityonthededucedaminoacidsequence.TheresultsofphylogeneticanalysisshowedthatACCoxidasefromLili umandfromTulipagesnerianaL.clusteredtogetherfirstly,andthencamethosefromdicotyledon,Orchi daceaeandGramineaecamesubsequently.

Keywords:ACCoxidase;cDNAcloning;Lilium;gene 百合花朵大、色彩雅,姿态优美,是世界上著名的五大切花之一,具有广阔的市场前景.百合属于乙烯跃变型花卉[1],其中ACC(1 氨基环丙烷 1 羧酸)

氧化酶(ACO)是乙烯生物合成的关键限速酶,并且

ACO基因的表达是非组成型的,其转录水平上的调控可能控制着乙烯的生成速率[2].因此利用反义

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收稿日期:2007 12 21;修改稿收到日期:2008 03 31基金项目:国家自然科学基金(30371013)

作者简介:刘鲜艳(1981-),女(汉族),在读硕士,主要从事百合生物技术育种研究.E mail:lxianyan2008@,,,.E