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中国农业科学 2006,39(5):984-989 Scientia Agricultura Sinica

沙田柚杂种胚性愈伤组织的诱导及遗传鉴定

宋健坤，邓秀新

（华中农业大学园艺林学学院作物遗传改良国家重点实验室，武汉 430070）

【目的】沙田柚（Citrus grandis [L.] Osbeck cv.Shatian）是中国的特有品种，其愈伤组织难以诱摘要：

导。为进一步进行细胞工程研究，本研究通过与其它品种杂交的方法获得杂种胚性愈伤组织。【方法】以沙田柚为母本，用体细胞杂种橘柚+无酸甜橙 ([C.reticulata Blanco× C.paradisi Macf.] cv.Nova+C.sinensis [L.] Osbeck cv.Succari)为父本进行杂交，90 d后将幼胚取出，在MT + ME（麦芽提取物，500 mg·L-1）和MT + GA3（1 mg·L-1）两种固体培养基上培养。【结果】幼胚培养约5个月左右，在两种培养基上从胚状体和幼小植株的下胚轴处都长出了可继代保存的胚性愈伤组织，经细胞流式仪和SSR鉴定，该胚性愈伤是三倍体杂种愈伤，继代保存两年后，在MT+乳糖（50 g·L-1）培养基上仍可以产生大量的胚状体，具有较强的胚状体发生能力。【结论】沙田柚与体细胞杂种杂交后，可以较容易地获得其杂种的胚性愈伤，对沙田柚种质资源的保存和利用具有重要价值。

关键词：沙田柚；胚性愈伤；细胞流式仪；SSR；遗传鉴定

Induction and Genetic Identification of Embryogenic Calli from

Hybrids of Shatian Pummelo

SONG Jian-kun，DENG Xiu-xin

(National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement，

College of Horticulture and Forestry, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070)

Abstract: 【Objective】Shatian pummelo (Citrus grandis [L.] Osbeck cv. Shatian) is a peculiar variety in China and it is difficult to regenerate embryogenic callus. Other varieties were used to cross with it in order to gain the callus for further research on cell engineering. 【Method】Shatian pummelo was used as the female parent and crossed with the somatic hybrid NS (Nova Tangelo + Succari Sweet orange, [C. reticulata Blanco × C. paradisi Macf.] cv. Nova + C. sinensis [L.] Osbeck cv. Succari). About 90 days after pollination, the embryos obtained from crosses were cultured on the solid media of MT + ME (malt extraction, 500 mg·L-1) and MT + GA3 (1 mg·L-1). 【Result】The embryogenic callus was induced from the embryoids and plantlets’ hypocotyls and can be subcultured. Flow cytometry and SSR analysis verified that the callus was from the triploid hybrid. The callus showed strong capability of embryogenesis and was able to produce a large number of embryoids on MT+ Lactose (50 g·L-1）medium after subcultured for two years.【Conclusion】It is comparatively easy to gain embryogenic callus when Shatian pummelo is crossed with somatic hybrid. The callus is valuable for the conservation and utilization of Shatian pummelo germplasm.

Key words: Shatian pummelo (Citrus grandis [L.] Osbeck cv. Shatian); Embryogenic callus; Flow cytometry; SSR; Genetic identification

0 引言

【本研究的重要意义】沙田柚是中国重要的栽培品种，目前栽培面积约有6.61×104ha，品质优良，但

由于是单胚品种，其胚性愈伤组织的诱导比较困难。而柑橘的原生质体操作技术如体细胞融合，需要以胚性愈伤组织为材料，胚性愈伤组织还是柑橘转基因和种质资源离体保存的重要材料。因此，沙田柚胚性愈

收稿日期：2005-06-30；接受日期：2006-01-10

基金项目：国家自然科学基金（30471201）和国家攻关项目（2004BA515B09）资助 作者简介：宋健坤（1978-），男，山东烟台人，博士研究生，研究方向为柑橘三倍体育种。Tel: 027-87281300; E-mail: jiankunsong@。

通讯作者邓秀新，男，教授，长期从事柑橘生物技术等遗传育种研究。E-mail: xxdeng@