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986 中 国 农 业 科 学 39卷

养基上，122个幼胚中有5个（4.1%）产生胚性愈伤组织。这些愈伤组织大部分是由幼胚先产生胚状体，再由胚状体产生愈伤组织，也有小部分愈伤组织是从幼胚萌发形成的植株的下胚轴处产生的（图1）。

对产生的愈伤组织用细胞流式仪进行了倍性检测，结果发现所得到的愈伤组织都是三倍体。这说明愈伤组织可能是二倍体沙田柚和四倍体体细胞杂种杂。 交而来（图2）

对部分愈伤组织的亲本来源用SSR分子标记进行了鉴定。从图3-A中可以看出4个愈伤组织都含有沙田柚的特征带，可以初步确定沙田柚是愈伤组织的亲本之一。从图3-B中可以看出愈伤组织4和5都同时具有父母本的特征带，可以确定是双亲的杂种。愈伤组织6和7均只具有（Nova+Sucarri）体细胞杂种的

表 1 接种幼胚在两种培养基上的胚性愈伤组织发生率

特征带型，结合图3-A中的结论，也可以确定愈伤组织6和7也是沙田柚与（Nova+Sucarri）的杂种。

将愈伤组织在不加任何激素的MT基本培养基上继代保存，每个月继代1次，在继代保存的初期，有部分愈伤组织可以在MT基本培养基上直接产生胚状体，并萌发成苗，表现出较强的胚性发生能力。经过一段时间的继代，愈伤组织逐渐驯化，可以在MT基本培养基上稳定保存。2年后，为测试保存的愈伤组

织是否还具有胚性发生能力，笔者将部分愈伤组织挑

出，在不同的培养基上培养，诱导其产生胚状体（表2）。由表2可以看出愈伤组织的胚性发生能力在不同的培养基上有很大的差别。MT+ME（500 mg·L-1）培养基已无法诱导其产生胚状体，在MT+甘油（2%）

Table 1 Percentage of embryogenic calli derived from young embryos cultured on two media

母本 Female parent 沙田柚

父本 Male parents 橘柚 + 无酸甜橙

接种培养基 Culture media MT+GA3 (1 mg·L)

-1-1

接种胚数

Inoculated embryo No.

产生愈伤组织胚数 The embryo number that produced callus

胚性愈伤组织发生率

Percent of embryogenic callus (%)9.3 4.1 7.6

258 24 380

29

Shatian pummelo Tangelo + Sweet orange MT+ME (500 mg·L)122 5 合计与平均 Total and average

1. 从胚状体和植株下胚轴长出的愈伤组织；2. 继代保存的沙田柚三倍体杂种的胚性愈伤组织; 3. 在MT+乳糖（50 g·L-1）培养基上产生胚状体的愈伤组织；4. 在MT+乳糖（50 g·L-1）培养基上的胚状体

1. The calli initiated from the embryoids and plantlets’ hypocotyls; 2. Subcultured embryogenic callus of Shatian pummelo’s triploid hybrid; 3. The calli regenerating embryoids on the MT+ lactose (50 g·L-1) medium; 4. Embryoids on the MT+ lactose (50 g·L-1）medium

图1 愈伤组织诱导和再生结果

Fig. 1 The result of callus induction and regeneration