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5期 宋健坤等：沙田柚杂种胚性愈伤组织的诱导及遗传鉴定

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图2 细胞流式仪检测倍性（左边：对照2x峰值在50左右；右边:杂种愈伤组织3x峰值在75左右）

Fig. 2 Ploidy determination by flow cytometry (Left: diploid as the control, the peak value is about 50; Right: calli from the

pummelo hybrid, the peak value of 3x is about 75)

bp 1 2 3 4 5 6 7

bp 1 2 3 4 5 6 7

400→

A

300→

200→

100→

B

A：Primer TAA27；B：Primer TAA1。1. Marker；2. 母本沙田柚；3. 父本（Nova+Sucarri）体细胞杂种；4～7：子代愈伤组织

1. Marker; 2. Female parent: Shatian pummelo; 3. Male parent: somatic hybrid (Nova+Sucarri); 4-7: The calli of putative hybrids

图3 用SSR标记对愈伤组织亲本来源进行鉴定 Fig. 3 Genetic identification of calli by SSR

培养基上也只有零星几个胚状体产生，而在MT+乳糖（50 g·L-1）培养基上仍可以产生大量的胚状体。这说明该愈伤组织的胚性发生能力对培养基中糖的选择比较敏感，在乳糖培养基上仍具有较强的胚性发生能力。

表 2 愈伤组织在不同培养基上的胚性发生能力 Table 2 The embryogenesis capacity of callus on different media

培养基 Medium MT+ME (500 mg·L-1) MT+Malt Extraction MT+甘油（2%） MT+Glycerol MT+乳糖 (50 g·L) MT+Lactose

表中数据代表处理中3个重复的平均值±SE Values in the table represent means of three replicates±SE

-1

3 讨论

柚的胚性愈伤组织的诱导相对来说比较困难，迄今，世界各地实验室还缺乏能继代保存的柚品种胚性愈伤组织，这可能与柚的单胚性有关，因为一般来说单胚性的品种比多胚性品种更难诱导出胚性愈伤组织。霍合强在研究中也已经证实了单多胚混合的品种本地早橘比多胚性品种较难诱导出胚性愈伤组织[7]。由于柚胚性愈伤组织诱导的困难性，一些学者尝试着用子叶或茎等诱导非胚性愈伤组织，如Begum等用幼苗的子叶诱导获得了3个柚品种的愈伤组织，并进一步再生植株[8]，但都不是胚性愈伤组织；Chaturvedi等以茎为外植体也诱导出愈伤组织，进一步从愈伤组织诱导出了芽[9]。国外也有关于柚胚性愈伤组织诱导

胚性发生能力 (个/g) Embryogenesis capacity

0 11.7±2.0 729.3±63.9