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988 中 国 农 业 科 学 39卷

的报道，如Song等以柚的未成熟的胚珠为材料在MT+2,4-D(0.1 mg·L-1

)+BA(0.01 mg·L-1

)培养基上诱导出了胚性

愈伤组织[10]。胚乳培养是获得柚三倍体愈伤组织的一条途径，如Gmitter等从葡萄柚和柚的胚乳诱导出了三倍体的愈伤组织，但都不能成苗[11]；Yang等用被Suisho-Buntan柚授粉的Tosa-Buntan柚的胚乳获得柚三倍体的愈伤组织，并再生植株[12]。但到目前为止，从柚未发育完全的幼胚直接获得愈伤组织还未报道，笔者从沙田柚杂种发育不完全的幼胚直接获得了三倍体的愈伤组织，SSR分子鉴定的结果也证明了这些愈伤组织中含有母本（沙田柚）和父本（橘柚+无酸甜橙）的特异标记。本研究得到的胚性愈伤组织尽管是杂种，但由于含有沙田柚的遗传背景，这种胚性愈伤组织将是人们未来利用沙田柚资源的一种“桥梁材料”。这种胚性愈伤组织可以在MT基本培养基中继代保存，迄今，已经继代保存了2年，在MT+乳糖（50 g·L-1）培养基上仍有较强的胚性发生能力。

本试验中在MT + ME（麦芽提取物, 500 mg·L-1）和MT + GA3（1 mg·L-1）这两种固体培养基中均诱导出了沙田柚有性后代的胚性愈伤组织，这两种培养基是进行柑橘胚挽救常用的培养基配方[13]。柚是单胚品种，直接进行胚培养难以获得胚性愈伤组织。而目前全世界能从柚子诱导胚性愈伤组织的几例中，一例是胚乳培养[11,12]，一例是胚珠培养[10]，再就是本试验的结果。由于柚的单胚性，实际上以上几例结果得到的愈伤组织应该都是杂种或杂交（自然授粉或人工授粉）后的材料，所培养的基因型中均有父本的遗传物质。本试验是人工授粉杂交，后代具有胚性愈伤组织发生能力，这种能力应该来自父本，因为父本中的橘柚（Nova）和甜橙（Succari）均是多胚品种，具有较强的胚性愈伤组织发生能力。这启示我们，对于那些难以诱导胚性愈伤组织的基因型，如枳壳（Poncirus trifoliata），不妨先给它杂交，尔后再诱导胚性愈伤组织，即使获得的是一种杂种的胚性愈伤组织，也可以为生物技术利用这些资源提供“桥梁”。

4 结论

沙田柚的胚性愈伤组织很难诱导，但是在与体细胞杂种Nova橘柚+Succari无酸甜橙杂交后，其杂种幼胚能在较为简单的培养基上产生三倍体的胚性愈伤组织。这些胚性愈伤组织经过继代驯化，可以在不加任何激素的MT基本培养基上继代保存，保存2年后，在MT+乳糖（50 g·L-1）

培养基上仍具有较强的胚状体发生能力。SSR分子标记鉴定的结果表明，它是双亲杂种，包含了沙田柚的遗传背景，对沙田柚种质资源的利用和保存都具有重要价值。

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