生物分析化学作业(4)

3.2 蛋白质表征与可靠定量的IS选择

当在蛋白质水平定量时，只有与分析物序列和物理化学性质相似的蛋白质才能符合IS的要求。由于牛α-La的物种变体具有高度序列相似性，人α-La被选作此研究的IS。人α-La、牛α-La、β-Lg A，β-Lg B序列如图1所示。人α-La与牛α-La序列具有高度相似性（＞72%），其性质如分子量PI也与牛α-La的性质很匹配。因此，在整个分析过程中人α-La与牛α-La显示相同的行为，因此是非常合适的IS。此外，其色谱和质谱行为也被评估了。图2显示了牛α-La、β-Lg A、β-Lg B和人α-La（IS）的混合物的色谱检测量，每个样品浓度都为50μgmL 1（也就是，牛α-La，3.5×10 6mol L 1；β-Lg A，2.7×10 6mol L 1；β-Lg B，.7×10 6mol L 1；人α-La，3.6×10 6mol L 1）。人α-La在色谱时间轴上的位置表明其非常适合用来做IS。人α-La、牛α-La、β-Lg A和β-Lg B的原始质谱和解卷积后的质谱现在在图3中。牛α-La和人α-La的CSDs是相等的，显示荷电状态在5+至13+，最大值为6+(图3a和b)。解卷积后的质谱显示，存在的主要成分是：牛α-La的分子量为14178碎片、人α-La的分子量为14070碎片、牛β-Lg A的分子量为18363碎片和牛β-Lg B的分子量为18276碎片。所有数据都与以前文献高度吻合。因此，人α-La具有良好的分析行为，可以被用作IS。