生物分析化学作业(3)

进行多电荷离子解卷积。选区监测模式进行定量。选区（m/z）：牛α-La，2357–2367；人α-La（IS），2339–2349; β-Lg A，1665–1675；β-Lg B，1656–1666。

2.3 空白基质制备

将0.2g婴儿奶粉溶解在包含0.2%聚乙二醇辛基苯基醚的0.3M的氯化钠溶液中。然后，用TFA将其PH调节至4.6，用水将其体积调至10mL。室温下用高速搅拌机混合10min，过滤，得到5mL滤液，在微波实验室工作站中消化。试验参数为：工作功率，250W;时间，10.5min。消化处理后，将溶液通过0.22μm过滤器。

2.4 标准溶液的制备

含有牛α-La，β-Lg A，β-Lg B和人α-La（IS）的存储液（1 mg mL 1）在水中制备。含有牛α-La，β-Lg A，β-Lg B的混合溶液（100μg mL 1）在空白基质中制备。所有溶液都在-20℃被放在黑暗中不超过1个月。工作标准溶液都是由这些存储溶液制备而成，并在使用之前用空白基质逐步快速稀释。

2.5 样品制备

每个均匀样品(0.2g)都用500μL人α-La（1 mg mL 1）做内标。这些加标样品被溶解在9mL包含有0.2%（w/v）聚乙二醇辛基苯基醚的0.3M氯化钠溶液中。然后，将溶液用TFA调节PH至4.6，接着加水至10mL。室温下混合均匀10min后，用高速离心机离心在2.1×104g离心15min后。上层清液采用0.22μm的过滤器过滤后，备用。

2.6 蛋白质鉴别

根据在标准溶液中相应标准的保留时间和质谱（选取监测模式），样品中的三种蛋白质可以清晰鉴别。

3、结果与讨论

β-Lg A，β-Lg B是β-Lg的两个变体。这两个变体的区别只在64和118位置的连个氨基酸取代，使得它们的质量相差86Da，如图1所示。在以前的研究中，β-Lg A和β-Lg B无法完全分开，所以经常以总称β-Lg表示。在此前的研究中，三种不同长度和粒径的LC色谱柱被用作对比分离效果，例如，（1）Waters Symmetry 300 C18色谱柱（75 mm×4.6 mm, 3.5μm）(2) Waters Symmetry 300 C18色谱柱 (100 mm×2.1 mm, 3.5μm) 和(3) Waters Acquity UPLC BEH300 C18 色谱柱 (150 mm×2.1 mm, 1.7μm)。结果表明，色谱柱3的分离效果明显好于色谱柱1和2。这也许是因为其粒径减小到1.7μm的原因，净表面积的增加使得柱效提高。所以作者选择了色谱柱3。这种条件下，在8min内所用分析物都能被完全分离。