1166·综述·

突变的细胞中, 该抑制剂发挥明显的细胞毒作用。

我们的研究表明, 以Raf与其他蛋白相互作用为靶点的药物研发有着光明的前景[48]。MCP-110作为抑制Raf与Ras相互作用的小分子化合物, 能显著抑制表达Ras的悬浮细胞的生长, 但不抑制表达Raf-1的细胞的生长, 表明MCP-110特异性抑制Ras-Raf之间的相互作用[49]。Raf与肿瘤抑制蛋白Rb的相互作用是药物作用的另一个靶点。研究表明, Raf-1结合并诱导Rb磷酸化, 进而介导Rb的抑制以及S期发展[50]。在细胞株中小分子的合成肽阻断了Raf-1-Rb相互作用, 从而抑制A549异种移植肿瘤的生长[51]。合成肽作为药物的应用, 因其短暂的半衰期以及其运输传递问题而受到限制, 小分子药物RRD-251具有相同的疗效。该药物依赖完整的Rb表达水平, 它在体外能抑制肿瘤细胞增殖、异种移植瘤的形成和肿瘤血管生成[52]。尽管没有临床数据支持, 但这些实验结果依然表明, 以Raf-1-R相互作用为靶点可能是一个成功的抗癌策略。

3.2.2 反义寡核苷酸 反义核苷酸是人工合成、化学修饰的短片段的DNA或RNA, 主要通过Watson-Crick碱基配对与编码目的蛋白的mRNA相互作用, 从而抑制蛋白表达。利用反义寡核苷酸来抑制Raf的表达是一个进步。ISIS 5132是一个含有20个核苷酸的反义寡核苷酸, 能抑制Raf-1的mRNA的表达。它在前期临床试验中抑制肿瘤的发育, 而二期临床实验表明, 其单独使用时没有任何作用[49]。LEra-fAON是由15个核苷酸组成的反义寡核苷酸的脂质体衍生物[49]。用脂质体包裹反义寡核苷酸的方法可以保护寡核苷酸远离核苷酸酶, 并有利于在细胞中的运输。然而, 临床一期试验证明, 脂质体的存在影响了药物的靶向性, 且增加了药物的副作用[53-54], 因此, 利用该方法抑制Raf的观点遭到质疑。随着运输传递方式的研究发展, 脂质体包裹反义寡核苷酸技术可能会有所突破。

3.2.3 Raf抑制剂的反常效应 RAF激酶家族能调节细胞生长、分化以及生存等一系列生命过程。当用Raf抑制剂ZM 336372处理细胞时, 体外分离和检测Raf激酶发现ZM 336372介导了一系列反常的Raf激酶激活过程[55]。Therrien及其同事Sicheri等[56]首次证实, 两个Raf蛋白发生二聚化对激活该蛋白至关重要。如果抑制Raf二聚化则会阻断激活过程, 从

而终止癌细胞的生长。另外的3篇文章也证明了这个观点[57-59]。我们的研究表明, Raf-1同源二聚化或Raf-1与B-Raf异源二聚化结合对激活Raf激酶至关重要[60]。当使用B-Raf特异性抑制剂, 或Ras突变介导的Raf二聚化发生时, Ras/Raf/MEK/ERK信号通路上的激酶活性都显著提高。

在高表达B-Raf突变体的细胞系中Raf抑制剂具有高效性, 并通过抑制ERK信号通路进而抑制肿瘤发生的信号转导途径[59]。体外实验中也证实, 当用B-Raf抑制剂处理肿瘤细胞时, 肿瘤细胞的增殖明显被抑制。然而, 在敲除活化的B-Raf突变体并且表达Ras突变体的细胞系中, Raf抑制剂的作用效果正好相反[57,59]。我们的研究表明, 由Raf抑制剂介导的Raf异源二聚化能够增强Raf激酶活性以及活化下游信号转导通路。这些结果表明, Raf-1和B-Raf形成一个二聚物, 只有这个二聚物的活性完全被抑制, 其下游信号通路才能被有效地抑制[60]。与此一致的是, B-Raf特异性抑制剂诱导的ERK活化不依赖Raf-1的参与[57-58]。并且B-Raf抑制剂能够激活Raf-1, 该过程不依赖B-Raf的参与[49]。在B-Raf缺失的成纤维细胞中, B-Raf特异性抑制剂能介导ERK磷酸化。由此, 我们得到这样的结论: 抑制剂和药物联合诱导的Raf-1同源二聚化能够有效增强Raf激酶活性和活化ERK信号转导通路。Heidorn等[59]在K-Ras突变并且B-Raf失活的小鼠黑色素瘤模型中得到与上述一致的结果。

4 总结与展望

随着分子生物学技术的发展, 以Raf-1为靶点的肿瘤治疗逐渐受到人们的关注和认可。由于Raf-1激酶在信号通路的调节以及许多复杂的病理生理现象调控方面发挥重要作用, 其在肿瘤治疗方面亦发挥着重要作用, 以Raf-1为靶点的治疗研究已经在临床前期和不同临床试验中应用, 并且与传统的化疗方法相比具有毒性小且特异性强的特点, 因此以Raf-1为靶点的治疗有相当大的应用前景。研究表明, 在大部分真核细胞中存在有Ras/Raf/MEK/ERK信号通路, 随着人们对Ras/Raf/MEK/ERK信号转导通路的研究, 以Raf-1为靶点的肿瘤治疗前景将逐渐扩展, 从临床研究进入临床治疗, 为以后的肿瘤治疗提供更多的手段与方法。