乳制品中产细菌素乳酸菌的筛选(4)

20株兼性异型发酵乳酸菌的测试数据表明其间存在五个生化模式（表2）。5株（2032，2035，2102，2192和2193）能够从纤维二糖，葡萄糖，甘露醇，甘露糖，蜜二糖，棉子糖和核糖形成酸，被定性为植物乳杆菌（Ballows等人，1991年；Dellaglio等，1994，夏普，1979年）。六株产酸菌株（2026，2096，2114，2116，2171和2176）从纤维二糖，葡萄糖，甘露醇，甘露糖，蜜二糖和核糖产酸（2171除外），但不能从棉子糖和鼠李糖视为属L.paraplantarum（菲茨西蒙斯等，1999）。四株（2071，2101，2185和2194），可从纤维二糖，葡萄糖，甘露醇，甘露糖，蜜二糖，棉子糖，鼠李糖和核糖形成酸（其中2个），被定义到L.戊糖乳酸菌种。另外三株（2092，2093和2099），能够从以上除了棉籽以外的所有糖产生酸，被列为属L.Rhamnosus；二株（2111和Q20.3）由纤维二糖，葡萄糖，甘露醇，甘露糖和核糖生产酸，被视为属副干酪亚种（Ballows等人，1991年;Dellaglio等，1994;菲茨西蒙斯等，1999;夏普，1979年）。

所有的菌株，除了两株（Q20.4及Q30.10），专性异型发酵乳酸菌是能够成长在15℃的（数据未所示）。六株（R30.9，R3.2，R3.6，R3.8，Q30.1，Q30.8）能从阿拉伯糖，半乳糖，蜜二糖（50％），核糖，木糖酸形成酸，但不能从纤维二糖，甘露醇，甘露糖（除了一个），但不能从松三糖，棉籽糖，鼠李糖和蔗糖产酸，被分类为L.乳酸短杆菌属（表2；Ballows等，1991；Dellaglio等人，1994年）。两株（Q20.4和Q30.10）能利用半乳糖，甘露糖，蜜二糖，核糖和蔗糖产酸，被视为L.fermentum。3株（W21.13，Q30.9和L30.6）能利用阿拉伯糖，半乳糖，蜜二糖，松三糖，核糖产酸，被视为属布氏菌（Ballows等，1991；Dellaglio等，1994；菲茨西蒙斯等，1999）。

3.2.2全细胞蛋白电泳（SDS-PAGE）的特征

根据SDS-PAGE电泳结果（图1），表型鉴定被证实为三种植物乳杆菌，三种paraplantarum 一种副干酪亚种。一种副干酪属，一种布氏属和一种L.fermentum。重复性为92％。因此，每2到9株分8个集群进行区分。Q20.3和副干酪亚种分为第一组（平均相关性R = 0.62）。第二组（平均相关R = 0.80）包括四株（L.植物乳杆菌1株，Paraplantarum属1株，戊糖乳杆菌2株，L. Pentosus1株）。第三组（R = 0.84）由8株组成（每一个物种都有2株， paraplantarum和rhamnosus，2株L.plantarum根据表型特征分类）还包括paraplantarum参考菌株。5株（表型鉴定的3株L.戊糖植物乳杆菌）和植物乳杆菌参考菌株为第四组（R = 0.84）。第五组由一组7株（相似性为80.5％）表型鉴定为布氏（2株），短杆属（4株），L.发酵（1株），没有任何参考菌株。一株L. fermentum（D20.4）和L. fermentum参考株组成第六组（R = 0.79）。L30.6，表型特征为布氏属和L.布氏参考菌株（R = 0.85 ）并形成第七组。Q30.1（L.植物短杆菌）很独特，同样，2111和2116，表型鉴定为L.副干酪亚种。副干酪属，和L paraplantarum形成了一个非常类似的整体轮廓，和其他不同菌株形成了第八组（R = 0.94 ），并分别进行划定。

3.3兼性的专性异型发酵乳酸菌的抗菌活性

专性异型发酵乳酸菌没有显示对任何目标菌株的抑制作用。相反，兼性异型发酵乳酸菌活性有几种模式的记录（见表3）。Y.enterocolitica对任何菌都没有抑制作用。所有的菌株都能抑制干酪乳杆菌，肠球菌，乳杆菌，戊糖片球菌，单核细胞增生李斯特菌Scott A，李斯特innocua，梭菌芽孢，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的增长。此外，大多数菌株（ 95％ ）对蜡状芽孢杆菌有抑制作用。70％和75 ％的菌株分别为对乳杆菌亚种和嗜热链球菌有抑制作用。乳酸菌helveticus对80％菌株所形成的抑制物质敏感。重要的是，病原体（李斯特innocua除外）受到的抑制作用较强，抑菌圈比乳酸菌和梭菌（抑制区< 18毫米）大了12到70毫米不等。 显示为单核细胞增生李斯特菌的被抑制的作用最强。乳酸菌是众所周知的能产生抗菌物质抑制食源性致病菌，如金黄色葡萄球菌，李斯特菌，梭菌，肉毒杆菌和其他（Aslim， Yuksekbag，Sarikaya，＆beyatli，2005；Psoni ，Kotzamanidis，Yiangou， Tzanetakis