中的印迹步骤。脂肪组织RNA的提取可换用(异)硫氰酸胍-CsCl超速离心法。当多糖与蛋白多糖的污染比较严重时，可下一个方法，通过增加一个有机溶剂的抽提步骤并改变RNA的沉淀条件而加以消除。

（二）可同时制备RNA、DNA与蛋白质的一步法

该法是(异)硫氰酸胍-酚氯仿一步法的改进方法。它是以(异)硫氰酸胍-酚的单相裂解试剂裂解细胞，然后加入氯仿后形成两相。变性的DNA与蛋白质位于两相的界面，保留于上层水相的RNA在RNA沉淀溶液中通过异丙醇沉淀与75%的乙醇洗涤进行制备。其中RNA沉淀溶液的成分为1.2mmol/L的NaCl与0.8mmol/L的柠檬酸二钠。由于RNA沉淀溶液的使用，该法制备的RNA样品极少有多糖与蛋白多糖的污染，可用于mRNA的纯化、Northern杂交、逆转录和RT-PCR反应等。处于界面的DNA与蛋白质可通过乙醇和异丙醇分别分级沉淀出来。该法制备的DNA，大小约为20kb，可作PCR反应的模板，蛋白质样品则主要用于免疫印迹。目前，该法已有多种商品化的单相裂解试剂供选择，是最常用的总RNA提取法，其产率与(异)硫氰酸胍-酚氯仿一步法相当。

（三）其它方法

RNA的分离纯化方法与方案还有许多，如(异)硫氰酸胍-CsCl超速离心法、盐酸胍-有机溶剂法、LiCl-尿素法、热酚法等，因各种原因目前已较少使用。

三、mRNA的分离与纯化

与大小和序列明确的rRNA、tRNA及核内小分子RNA不同，真核生物的mRNA在细胞中含量少、种类多、分子量大小不一。除血红蛋白及某些组蛋白外，绝大多数mRNA在其3'末端带有一个长短不一的多聚腺苷酸（polyadenylic acid）的结构，即poly(A)尾巴。以总RNA制品为起始材料，利用核酸的碱基配对原理，通过oligo(dT)-纤维素或poly(U)-琼脂糖凝胶的亲和层析，可以很容易地同时分离不同种类与大小的mRNA的分子群体。理论上，它们可编码细胞内所有的蛋白质与多肽分子。

（一）oligo(dT)-纤维素柱层析法

oligo(dT)-纤维素柱层析法是mRNA制备的一个标准方法。它是以oligo(dT)-纤维素填充层析柱，加入待分离的总RNA样品，其中poly(A)+RNA在高盐条件下，通过碱基互补，