仿抽提。

由于条件温和，SDS裂解法有利于大质粒DNA的提取。但该法在处理过程中，有一部分质粒DNA因缠结在细胞碎片上而丢失，故产率不高。

（四）其它方法

其它方法如小量一步提取法、牙签少量制备法及Triton-溶菌酶法等，各有特点与适用范围。小量一步提取法，直接将酚/氯仿与细菌培养物混合，同时完成细胞裂解与蛋白质变性两个过程，然后离心去除大部分胞核DNA与蛋白质，最后从上清中回收质粒DNA。该法简单快速、经济可行，可用于内切酶图谱分析。

（五）质粒DNA的纯化

目前，关于纯化的方法与方案非常多，都利用了质粒相对较小和共价闭环的结构特点。其中，纯化效果好而且适用范围广的方法主要有氯化铯-溴化乙锭等密度梯度超速离心法（简称CsCl-EB法）、聚乙二醇沉淀法和柱层析法。

1．CsCl-EB法 CsCl-EB法是一种沉降平衡离心法，经超速离心，离心介质CsCl形成一连续的密度梯度，在过量EB存在的条件下，各种不同密度的物质经离心平衡后得以

，浮于液面；RNA密度大（2.0g/cm3），分开。其中蛋白质密度小（1.3 g/cm3～1.4g/cm3）

沉于管底；各种DNA密度介于蛋白质与RNA之间，处于中部。过量EB处理前，细菌染色体DNA与不同分子构型的质粒DNA的密度均为1.7g/cm3左右，难以区分。经过量EB处理后，不同分子构型的DNA与EB的结合能力不一样，因而密度下降不一致，可有效分离。其中，闭环质粒DNA为超螺旋三级结构，EB不易插入，结合量少，密度下降小，约为1.59 g/cm3；而染色体DNA、开环质粒DNA以及带切口的环状质粒DNA可以嵌入更多的EB，密度下降较多，约为1.54 g/cm3，从而能与闭环质粒DNA分开。回收的闭环质粒DNA含有嵌入的EB，可采用有机溶剂抽提法或离子交换层析加以去除。经典的CsCl-EB法由于其容量大、分辨率高、纯化效果好，至今仍是质粒DNA纯化的标准方法。但该法很费时并需要昂贵的设备与试剂。

2．聚乙二醇沉淀法 聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）沉淀法是一种分级沉淀法。质粒DNA的粗制品首先用LiCl沉淀大分子RNA，并用RNase消化小分子RNA；然后在高盐条件下，用PEG选择性地沉淀大的质粒DNA；沉淀的质粒DNA进一步用酚/氯仿抽提，乙醇沉淀。该法简单、经济、适用广，尤其对碱裂解法提取的质粒纯化效果好，