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全国最新初中、高中试卷、课件、教案等教学资源免费下载 32．(8分)微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。下图甲、乙、丙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问题：

(1)上图甲所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一，它称为 ，若用该培养基培养大肠杆菌，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透压等条件。

(2)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。

(3)上图乙是平板划线法接种操作示意图，正确的操作顺序是A →B → (用字母和箭头表示)；找出图乙中两处错误的操作(用字母表示) 、 。

(4)上图丙是某同学用平板划线法接种后的培养基培养12h 后的实验结果，如果培养基上 ，则说明无菌操作基本符合要求。

33．(9分)构建基因文库是获取目的基因的方法之一。下图甲表示cDNA(互补DNA)文库构建过程，其中①～③表示有关操作步骤。下图乙表示用限制酶PstI 、EcoRI 和SalI 单独或联合

切割图甲中的质粒DNA 分子，经凝胶电泳分离后所得到的图谱。请据图回答下列有关问题：

(1)设计引物是cDNA(互补DNA)文库构建过程的第一步，引物长度一般在15-30个碱基之间，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA 聚合酶进行反应。若引物过短则存在 等问题。

(2)图甲过程②、③分别需要在 、 酶的作用下形成cDNA 的第一条链、第二条链，这两个过程都需要利用 作为原料。

(3)在⑤和⑦过程中cDNA 和质粒DNA 的3’端都要各加上一段寡聚核苷酸(20个以下碱基的核苷酸短链)，制成 ；过程⑧在DNA 连接酶的作用下，形成重组DNA 。图示这种情况下能