人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

材料和方法

一．材料

ｌ材料、试剂和仪器

新鲜脐血：上海国际和平妇幼保健院提供。

细胞分离液Ｆｉｃｏｌｌ．Ｐａｑｕｅ（１．０７７９／ｍ１）．．Ｓｉｇｍａ公司，美国。

羟乙基淀粉（ＨＥＳ）：Ｓｉｇｍａ公司，美国。

人血清纤维连接蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）：Ｃｈｅｍｉｃｏｎ公司，美国。

ＤＭＥＭ培养基（干粉）：Ｓｉｇｍａ公司，美国。

胎牛血清（ＦＢＳ）：Ｇｉｂｃｏ公司，美国。

血管内皮生长因子ＶＥＧＦ：Ｂｉｏｓｏｕｔｒ．ｅ公司，美国。

胰岛素样生长因子ＩＧＦ．１：Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ公司，美国。

碱性成纤维细胞生长因子ｂＦ（３Ｆ：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ公司，美国。

表皮生长因子ＥＧＦ：Ｃｙｔｏｌａｂ公司，美国。

胰蛋白酶：Ｓｉｇｍａ公司，美国。

ＥＤＴＡ：Ｓｉｇｎｍ公司，美国。

ＰＢＳ溶液：上海医药化学试剂厂。

ＣＤｌ３３抗体：ＭＡＣＳ公司，德国。

Ｆｌｋ－ｌ抗体：ｓａｎｔａｃｒｕｚ公司，美国。

ｖＷＦ抗体：ｓａｎｔａｃｒｕｚ公司，美国。

ＦＩＴＣ标记山羊抗兔ＩｇＧ：ｖｅｃｔｏｒ公司，美国。

ＮＯ检测试剂盒：南京建成生物工程研究所。

超净台：上海汇龙仪表电子有限公司环境工程装配分公司。

水平离心机：ＥＰＰＥＮＤＯＲ＿Ｆ公司，美国。

恒温磁力搅拌器：ＩｋａｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉＬ德国。

３７℃、５％Ｃｔｈ高湿度恒温孵育箱：ＴｈｅｒｍｏＣｏ，美国。

电热恒温水浴箱：上海医疗器械七厂。

倒置相差显微镜：Ｎｉｋｏｎ，日本。

数码照相机：Ｎｉｋｏｎ，日本。７