Primer Premier 5.0中文使用说明书

Multiplex/Nested Primer复式及巢式PCR反应引物窗口

巢式PCR反应通常能大幅提高灵敏度同时又减少非特异性扩增产物通常在模板DNA浓度太低或不纯时采用您可以使用自动搜索或按您实验的需要搜索然后从中选择一系列合乎要求的引物PRIMER PREMIER可以确认它们是否会形成二聚体来帮助您选择巢式PCR反应引物当您接受搜索结果选择菜单Function >Multiplex/Nested Primers选项即可打开该窗口所有引物与全序列以图形显示在窗口顶部序列上的框架代表窗口中间放大显示的部分序列所在的位置通过拖动横行滚动条可以改变放大显示的区域所有提供的引物以竖线形式在顶部的图框显示

以蓝色三角形或红色三角形在下面的放大框中显示蓝色代表正向引物红色代表反向引物

点击三角形即选定一条对应的引物应用于您的巢式PCR反应同时三角形由空心变为实心表明已被选中选中的引物会在下面的图框中以图表形式显示您会看到在您选择引物的同时已选引物间可能存在的交叉二聚体也同时显示出来PRIMER PREMIER能即时分析所有的已选引物并显示它们之间间可能存在的交叉二聚体结构您可以继续选择引物直到您找到一组没有或很少有稳定的交叉二聚体的引物要剔除一条已选引物非常简单再次点击对应的实心三角形就可以了您也可以手动添加一条引物这样便于您使用已有的引物或通用引物您

也可以手动添加所有的引物并分析它们之间的能否形成交叉二聚体您可以指定输入的寡聚核酸作为正向引物还是反向引物它们的起始位置和序列如果不指定起始位置则默认为

5末端第一个碱基如果想删除一条引物只需选定并点击Delete按钮您可以打印模板序列及所有的引物已选引物显示为实心三角形未选引物显示为空心三角形列表包含的引物以及所有可能的交叉二聚体结构也同样被打印出来Database引物数据库窗口引物数据库可以用来保存引物序列您可以为每一条引物命名并保存在一个原有的或新建的数据库中

在数据库窗口中您可以使用Order Primers按钮来定购引物有两种主要方法可以将已选的引物输入到数据库中您可以在Search Results窗口中标记想选择的引物

然