皮质下缺血性血管性疾病的MTHFR基因多态性_朱小(2)

时间：2025-04-19

720ChinJNervMentDis Vo.l36,No.12 Demcember2010

经心理学评估:应用简易精神智能检查量表(min-imentalstateexamination,MMSE)、临床痴呆量表(clin-i

caldementiarating,CDR)、老年抑郁量表(thegeriatricdepressionscale,GDS)测试。认知功能损害评定标准:MMSE标准为文盲[17分,小学[20分,中学或以上[24分(文盲组、小学以中学或以上的评分折算如文盲17分=24分),且CDR>015;»神经影像学检查(MRI):广泛脑室旁和脑深部白质损害,多发性腔隙性梗死。SIVD组排除标准:¹早期出现明显记忆障碍和进行性记忆衰退;º头MRI未发现相应的脑血管疾病的证据。对照组入组标准:¹神经心理学评估无异常;º头MRI未发现相应的脑血管疾病的证据。

SIVD组46例,其中男35例,女11例,平均年龄(69189?8191)岁,平均受教育程度(7175?4114)年;对照组43名,其中男21名,女22名,平均年龄(64119?11104)岁,平均受教育程度(8158?4187)年。以上研究对象全部来自安徽医科大学第一附属医院,均为随机选择、无血缘关系的汉族人。病例组和对照组均签署知情同意。

1.2 研究方法标本基因组DNA的制备采用TaKa-Ra(宝生物工程大连有限公司)提供DNA抽提试剂盒,按说明书中提供的实验步骤进行。

PCR扩增反应:PCR反应体系体积为25LL,5LLDNA,2mMdNTP1LL,引物对2LL,10@PCR缓冲液215LL,Taq聚合酶0125LL,蒸馏水14125LL。PCR反应条件为94e预变性5min,94e60s,60e30s,72e60s,共30个循环。72e延伸7min。

RFLP分析:¹HinfI内切酶消化产物:取10LLPCR产物,10@buffer2LL,H2O7LL,HinfI酶1LL,37e水浴过夜;º12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析酶切产物:取10LL酶切产物加入12%PAGE负极端的加样孔,以溴酚蓝为指示剂,溴化乙锭(EB)为染色剂,在80V电压下电泳90min,360nm紫外线灯下观察带型并予定型,标准分子量对照为DL2000Markers。引物的设计及合成:引物设计参照有关文献

[3]

CCCGAAGC-3c,下游引物P25c-AGGACGGTGCGGT-GAGAGTG-3c。

1.3 统计学方法采用SPSS13.0进行统计学分析。病例组与对照组基因型构成的差异用µ检验;两组间MMSE评分差异用Studentt检验;应用Logistic回归分析,采用比值比(OR)评价不同基因型对疾病的影响,并计算其95%的可信区间(95%CI)。检验水准A=0105。

2 结果

2.1 总体认知功能损害情况 SIVD组MMSE评分(24163?4135),对照组为(27119?2102),两组间统计学处理有统计学差异(P=01001)。

2.2 基因型判定经PCR扩增后MTHFR基因目的片段大小为246bp,根据酶切情况,MTHFR基因型有3种:T纯合T/T基因型有246bp一条带,C纯合C/C基因型有174bp、72bp两条带,杂合型C/T基因型有246bp、174bp、72bp三条带。

2.3 MTHFR基因型及等位基因频率见表1。由表1可知,SIVD组与对照组基因型均有统计学差异(µ

=71023,P=01030)。SIVD患者中MTHFR基因C/T、T/T基因型频率高于对照组,与SIVD存在正关联;而C/C基因型频率则明显低于正常人,与SIVD存在负关联。SIVD组中MTHFR基因等位基因C的频率为45165%,T等位基因频率为54135%;与对照组的C等位基因67144%、T等位基因32156%比较有统计学差异(µ=41286,P=01038)。

2.4 MTHFR基因多态性致SIVD效应 Logistic回归分析结果显示:变量基因型的Waldµ=61805,P=01033,说明3种不同基因型在SIVD组与对照组之间的差异有统计学意义。以C/C型作为哑变量,检验结果表明SIVD组与对照组之间C/T型与C/C型的差异有统计学意义(P=01041),OR=21954,95%CI:11045~81350;SIVD组与对照组之间T/T型与C/C型的差异也有统计学意义(P=01020),OR=31487,95%CI:11217-91993。以T/T型作为哑变量,SIVD组与对照组之间的C/T型与T/T型的差异无统计学意义(P=01773)。

,其序列为上游引物P15c-CAAAGGCCAC-

Table1 ComparisionofthedistributionofMTHFRgenotypeandallelegenotypebetweenSIVDgroupandcontrolgroup

表1 SIVD组与对照组MTHFR基因型频率与等位基因频率的分布

Groups组别SIVDgroupSIVD组Controlgroup对照组

n4643

ThefrequencyofMTHFRgenotypeMTHFR基因型频率(%)C/C28.26(13)55.81(24)

Thefrequencyofallelegenotype等位基因频率(%)

C45.65(21)1)67.44(29)

T54.35(25)32.56(14)

C/T34.78(16)1)23.26(10)

T/T36.96(17)1)20.93(9)

1)Comparedwiththecontrolgroup,P<0105 与对照组比较,P<0105