人参皂甙 Rh2对人乳腺癌MCF7AdrR细胞增殖和凋亡的(3)

人参皂甙 Rh2对人乳腺癌MCF7AdrR细胞增殖和凋亡的影响

(A ) , 每组设3个复孔, 实验至少重复3 次。按下列

公式计算抑制率( IR)。

IR(% ) = ( 1- Ates t /Acontrol ) &100%

23 Hoechst 33258染色检测细胞凋亡

将1 & 105 cell# mL- 1细胞接种于置有盖玻片的

六孔板中, 待细胞生长至70% ~ 80% 融合时, 用含05%新生牛血清的1640培液同步化20 h, 加入相应的药物继续培养24 h, 结束培养, 弃培液; 按照Hoechst 33258细胞凋亡检测试剂盒说明书进行: 室温固定10m in, 用PBS室温洗涤5m in & 3次; 加入Hoechst33258染色液, 室温染色5 m in后, 用抗荧光淬灭封片液封片; 荧光显微镜下观察并拍照, H oechst 33258激发波长345 nm, 发射波长487 nm, 阳性信号呈蓝色,凋亡细胞的细胞核呈致密浓染或呈碎块状致密浓染,

实验至少重复3次。

24 流式细胞仪

将1 &106 ce ll# mL- 1细胞接种于6 cm培养皿中,待细胞生长至70% ~ 80%融合时, 用含05%新生牛血清的1640培液同步化20 h, 加入相应的药物继续培养48 h, 结束培养, 收集培液, 可细胞刮勺, 轻柔刮下贴壁细胞, 用预冷的PBS吹打, 转移培液和细胞, 至预冷的 15mL离心管中, 于4 、2000 r# m in- 1离心5m in, 弃上清; 加入预冷的柠檬酸固定液1 mL, 重悬细胞。送中国科学院上海细胞生物研究所, 作流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期, 实验至少重复3次。

25 Western blot检测

当细胞生长融合至30% ~ 40% 时, 将MCF7 /AdrR细胞的培养液, 加入相应的药物作用48 h后, 细胞裂解液提取细胞总蛋白, 定量后取等量样本, 进行SDS- PAGE 电泳分离; 然后将蛋白转移至PVDF 膜上。将膜在封闭液中封闭2 h, 分别与Fas、Bax、B cl-2和Bc l- x l以及- actin 的一抗于4 孵育过夜。洗膜后, 再与二抗室温孵育1 h; TBST室温洗膜5 m in& 3次; 将膜转入新鲜配制的ECL化学发光孵育液中, 室温孵育5m in; 转入X 光暗盒中, 曝光3 m in, 显

影, 定影, 实验均至少重复3次。

3 统计学方法

用SPSS100软件完成统计学处理, 实验数据以

均数 标准差表示, 组间分析比较采用t检验, P <

005表示差异有统计学意义。

结 果

1 GS- Rh2对MCF7 /AdrR细胞增殖抑制作用

用MTT法检测GS- Rh2对MCF7 /AdrR细胞增殖

抑制作用, 结果发现GS- Rh2能明显抑制MCF7 /AdrR

细胞的增殖, 其抑制作用呈现出剂量- 时间依赖性,

与对照组比较有统计学差异(P < 005), 见表1。

表1 不同浓度人参皂甙Rh2 ( GS - Rh2 ) 在不同时间点对

MCF7 /AdrR细胞的增殖抑制作用

Table 1 Inh ibito ry of the CS- Rh2 on the MCF7 /AdrR ce lls at

the d ifferen t tim e

Con cen tration

( m ol# L- 1 )

T im e after add the CS- Rh2 ( h )