人参皂甙 Rh2对人乳腺癌MCF7AdrR细胞增殖和凋亡的(2)

人参皂甙 Rh2对人乳腺癌MCF7AdrR细胞增殖和凋亡的影响

肿瘤作用。人参皂苷单体Rh2 ( G - Rh2 )是从红参中分离得到的原人参二醇型单糖链皂苷单体化合, 是人

参的主要抗癌成分。国内外报道[ 3- 9] , Rh2对多种肿

瘤细胞(如小鼠黑色素瘤B16细胞、C6胶质瘤细胞、

人肝癌细胞SK- HEP- 1等)具有增殖抑制和诱导凋

亡作用。为此本实验以人乳腺癌MCF7 /AdrR 细胞株

为受试细胞, 研究GS - Rh2的诱导凋亡作用, 旨在进

一步阐明人参抗肿瘤作用机制, 为其应用于肿瘤的临床治疗提供实验依据。

材料与方法

1 材料

细胞培养 人耐药乳腺癌细胞MCF7 /AdrR, 购自中国科学院上海细胞研究所; 细胞贴壁生长, 用含

10%胎牛血清的RPM I1640培养基, 加阿霉素维持其

耐药性, 于37 、5% CO2、95% 空气饱和湿度培养箱

培养, 适时传代。

药品与试剂 人参单体Rh2, 纯度﹥ 98% , 上海

融禾医药科技发展有限公司提供; 盐酸阿霉素( adria

myc in, ADM ), 浙江海正药业公司提供。四甲基偶氮

唑盐, 购自上海实生生物有限公司; 兔抗Fas( 1 500)

多克隆抗体、鼠抗Bax ( 1 500)单克隆抗体、鼠抗Bc l- 2( 1 500 )单克隆抗体和兔抗B cl- xL( 1 500) 多克隆抗体, 均购自美国Santa C ruz公司; 鼠抗- ac

tin单克隆抗体, 购自美国S igma公司; 二抗(羊抗兔

及羊抗鼠) , 购自美国Rockland公司; TR ITC 标记的

羊抗鼠IgG, 购自上海鼎国生物技术有限公司; Ho

echst 33258细胞凋亡检测试剂盒, 购自碧云天生物

技术研究所。

仪器 培养箱和超净工作台, Thermo Forma公司

产品; 垂直式电泳仪和湿转装置, 购自美国B io- Rad公

司; 低温高速离心机, 美国Beckman coulter公司产品;

酶标仪, 美国Mou lar Dev ice 公司产品; 倒置显微镜, 日

本N ikon公司产品。

2 方法

21 分组

将对数生长的MCF7 /AdrR细胞, 按下述均分成6组: ! 对照组: 细胞加入等量的溶剂; ADM 组: 细胞加阿霉素1 g# mL- 1; Rh2组: 细胞加Rh2 40 mo l#L- 1; %ADM + 3 个剂量Rh2组: 细胞加阿霉素1 g#mL- 1和分别加不同浓度( 20, 40, 80 mo l# L- 1 )Rh2。22 MTT法检测GS- Rh2对细胞生长的抑制作用

取对数期细胞制成细胞悬液, MCF7 /Adr以4 &

103个细胞/孔接种于96孔板, 每孔100 L, 24 h 后,

药物组加入不同浓度的GS - Rh2, 使终浓度分别为

10, 20, 40, 80, 160 mo l# L- 1; 对照组与空白对照组加

培养液100 L。

分别在加药后24, 48, 72 h, 用MTT法检测各孔中

细胞的抑制率。用酶标仪检测490 nm 处吸光度值