华　中　科　技　大　学　博　士　学　位　论　文

于湿盒内37℃孵育15 min；

(10) PBS冲洗3次，每次5 min；

(11) DAB显色：甩去切片上的PBS缓冲液，每张切片上滴加约100ul新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3~10min，控制反应时间；

(12) 清水充分冲洗；

(13) 苏木素复染：将切片浸入苏木素90s，流水冲洗5min；

(14) 用l%盐酸酒精分化后充分水洗；

(15) 1%氨水返蓝后充分水洗；

(16) 梯度酒精脱水，二甲苯透明；

(17) 中性树胶封片。

2、CAIX主要实验步骤：

(1) 切片脱蜡和水化，将切片置3%过氧化氢溶液孵育10min，阻断内源性过氧化物酶的活性，高温高压抗原修复，5min×2次；

(2) 滴加正常山羊血清封闭液，室温20min；

(3) 再滴加一抗(浓度为3µg/ml)，置4℃冰箱过夜；

(4) PBS冲洗，2min×3次；

(5) 滴加生物素化山羊抗兔IgG，室温30min；

(6) PBS冲洗，2min×3次；

(7) 滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶，20~37℃20min；

(8) PBS冲洗，5min×4次；

(9) DAB显色，镜下控制显色时间；

(10) 清水充分冲洗。

(11) 苏木素轻度复染；

(12) 梯度酒精脱水，透明；

(13) 中性树胶封片。

四、免疫组化染色结果的判断

由2位以上病理医生在不知患者临床和病理资料情况下对免疫组化染色结果进行

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