线粒体DNA提取方法的比较(3)

DNA提取

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对该方法进行了改进。戴纪刚建立通过核质分离,即利用非离子型去污剂Triton2100能溶解核被膜以外的所有细胞膜的特点[4],分离细胞核 细胞质,来获取mtDNA。而高盐沉淀法通过SDS(十二烷基硫酸钠)破坏细胞膜、核膜,使蛋白质变性,从而游离出来核酸。蛋EDTA能抑制细胞中DNA酶的活性。白酶K进一步将蛋白质降解成小肽。加入饱和乙酸钠后,绝大部分线性大分子量DNA和蛋白质在SDS作用下变性形成沉淀,而环状mtDNA仍为自然状态,通过高速离心,除去绝大部分细胞碎片、染色体DNA及蛋白质,mtDNA仍在上清中。

上述方法都用酚 氯仿 异戊醇抽提蛋白质、乙醇沉淀核酸。但均优缺点并存。虽然碱变性法操作时间较短,但该类方法要求条件比较严格,不易重复。使用Triton2100将核质分离制备mtDNA法操

作时间短,但产量低,易降解。而高盐沉淀法操作简单,易重复,可依需用量扩大反应体系,使mtDNA质量得以轻松控制。因此,该法具有其它方法无法比拟的优点。

参

考

文

献

1　胡义德.人白细胞线粒体DNA的快速分离与鉴定.中

华血液学杂志,1997;18(11):605

2　戴纪刚.一种简单快速制备动物线粒体DNA的方法.

第三军医大学学报,2000;22(4):391

3　伍新尧.分子遗传与基因工程,河南医科大学出版社.

郑州,1997:p37

4　HymerWCetal.Isolationofnucleifrommammalian

tissuesthroughtheuseofTritonX2100.JHistolChemCytochem,1994:312(12):359

(2002206214　收稿)