南方医科大学 正交试验法优化啤酒花中黄酮成分(3)

发布时间:2021-06-11

/上海,抽滤装置,恒温箱,加样枪(10μl-200μl,100μl-1000μl),标记笔,旋转蒸发器。

5、实验材料及试剂

大鼠6只(体重200~250g雌雄各半),啤酒花150g,乙醇(浓度分别为30%,45%,60%),无水乙醇,10%的Al(NO3)3溶液,5%NaNO2的溶液,4%的NaOH溶液, 3.8%枸缘酸钠,ADP,PH7.4的磷酸盐缓冲液。 5.1 试剂的配制

5.1.1配制浓度分别为30%,45%,60%的乙醇各400ml,10%Al(NO3)3溶液15ml,5%NaNO2的溶液15ml,4%的NaOH溶液120ml,3.8%枸缘酸钠10ml,PH7.4的磷酸盐缓冲液;之后将ADP溶于PH7.4的磷酸盐缓冲液,配制为2 umol/L的ADP溶液10ml。

5.1.2大鼠乙醚麻醉下,断颈取血,3.8%枸椽酸钠抗凝处理。1000r/min,离心5min,取富含血小板血浆(PRP)存于冰箱备用。

5.2 材料的处理

啤酒花样品去除茎叶后,充分粉碎。

6、实验操作步骤

6.1 提取条件优化方法

对影响啤酒花黄酮类化合物提取的4个因素(乙醇含量、 料液比、 提取时间、 提取温度)的 3 水平进行正交试验,筛选出一个最佳组合。 6.2 啤酒花总黄酮的提取流程

有机溶剂浸提:称取8.00 g样品,加入一定量乙醇溶剂,用加热回流装置提取一定时间后过滤,将滤液定容为100 mL。 6.3 总黄酮测定方法

从定容滤液中精密量取6mL,置于25mL烧杯中,加5%亚硝酸钠溶液1 mL,摇匀,放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1 mL,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10 mL,摇匀,

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