基因工程思考题答案--删减后(3)

基因工程通宵版

因子的组合式调控作用

（三）转录后水平调控

（1） “加帽”和“加尾”的调控；（2）mRNA选择性剪接对表达的调控 ；（3）RNA编辑的调控；（4）mRNA转运调节

（四）翻译水平的调控

（1）翻译起始调控；（2）mRNA稳定性对翻译的影响

（五）翻译后水平的调控

（1）信号肽的切除；（2）新生肽链的修饰；(3) 肽链的剪接与正确折叠

第三章

1. 核酸分离纯化应注意哪些事项？一般的分离纯化分为哪些步骤？各步的要点是什么？

分离纯化核酸应注意：①应保证核酸一级结构的完整性，防止降解；②排除其它分子的污染。为了保证核酸结构与功能的研究，完整的一级结构是最基本的要求，因为遗传信息全部贮存在一级结构之内。保持核酸的完整性，即保持其天然状态。细胞内的核酸酶活力很高，在制取过程中必须防止核酸酶对核酸的降解。③防止化学因素(酸碱等)和物理因素(高温或机械剪切等)引起核酸变性或破坏。制备RNA要特别注意防止核酸酶的作用，因为RNase分布很广，活力很高；而对DNA更重要的是防止张力剪切作用，因为DNA分子特别长，容易断裂。

核酸的纯化：①首先是去除蛋白质。要点：从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。从核酸溶液中去除蛋白质常用酚/氯仿抽提法，在氯仿中加入少许异戊醇的目的在于减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。②用氯仿抽提处理，去除核酸溶液中的痕量酚。要点：如果下一步骤中酶反应的条件要求严格，最可靠的方法是再用水饱和的乙醚抽提一次，以彻底去除核酸样品中的痕量酚与氯仿，然后在68℃水浴中放置10分钟使痕量乙醚蒸发掉。

6.PCR反应的基本原理是什么？每个循环包括哪些步骤？有何应用价值？

PCR反应的基本原理：首先是双链DNA分子在临近沸点的温度下加热时便会分离成两条单链的DNA分子，然后DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸（dNTPs）合成新生的DNA互补链。此外，DNA聚合酶同样需要有一小段单链DNA来启动（“引导”）新链的合成。

每一个温度循环周期均是由高温变性、低温退火及适温延伸等三个步骤组成。

应用价值：PCR技术不仅可以用来扩增与分离目的基因，而且在临床医疗诊断、胎儿性别鉴定、癌症治疗的监控、基因突变与检测、分子进化研究，以及法医学等诸多领域都有着重要的应用。

9.PCR的引物设计应遵守哪些原则？如何对体系反应条件按优化？

原则：①PCR引物合成的DNA片段通常长15~25碱基，其中G＋C约占50%。

②在设计时必须特别注意引物之间不能互配形成双链结构，引物内部也不能形成发夹结构。③引物的3’末端必须与目的片段完全相配。④引物的5’末端可以不与目的片段互补，可以包含内切酶位点或启动子序列，但在下一轮反应中，这些序列会被同样合成。有时在扩增仅知其表达产物的目的片段时，可以在引物中设计成简并密码子。

体系反应条件按优化：①首先是使模板DNA解离成为单链，这个过程可以通过加热完成，在90~95℃条件下，根据模板DNA复杂程度，调整变性温度和时间。一般情况下选择94℃，30秒可使各种复杂的DNA分子完全变性。过高温度或高温持续时间过长，会对Taq