土壤中微生物的分离与纯化(4)

广东工业大学土壤中微生物的分离与纯化实验报告

在高氏一号培养基中加入1mL的0.5%重铬酸钾，在马铃薯蔗糖培养基中加入1mL的1%的链霉素，然后分别倒平板。

b) 制备土壤稀释液 称取土样5g，放入盛有45mL无菌水并带有玻璃珠的

烧瓶中。震荡摇晃约二十分钟，使土样与水充分混合，将菌分散，配制成10土壤溶液，用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀，然后再用一支无菌吸管从此试管中吸取1mL土壤悬液注入另一盛有9mL无菌水的试管中，以此类推制成10-2，10-3，10-4,10-5,10-6各种稀释度的土壤溶液。

c) 分离微生物

操作步骤：

分离细菌

i. 涂布 将牛肉膏蛋白胨两个平板底面分别用记号笔写上10-5和10-6两种稀释度，然后用两支1mL无菌吸管分别由10-5和10-6两管土壤稀释液中各吸取200uL对号放入已写好稀释度的平板中，加入八个灭菌的玻璃珠轻轻晃动，涂布均匀，然后将玻璃珠倒出。

ii. 培养 倒置于37℃温室中培养1~2天

分离放线菌

i. 涂布 将高氏一号两个平板底面分别用记号笔写上10-3和10-4两种稀释度，然后用两支1mL无菌吸管分别由10-35和10-4两管土壤稀释液中各吸取200uL对号放入已写好稀释度的平板中，加入八个灭菌的玻璃珠轻轻晃动，涂布均匀，然后将玻璃珠倒出。

ii. 培养 倒置于37℃温室中培养3~5天

分离酵母菌与霉菌(如图1)

i. 涂布 各取两个葡萄糖与蔗糖平板底面各自用记号笔写上葡10-4、葡10-5和蔗10-4和蔗10-5两种稀释度，然后用1mL无菌吸管分别由10-4和10-5两管土壤稀释液中各吸取200uL对号放入已写好稀释度的平板中，加入八个灭菌的玻璃珠轻轻晃动，涂布均匀，然后将玻璃珠倒出。

ii. 培养 倒置于37℃温室中培养3~5天

E. 挑菌

划线分离 使用接种环从待纯化的菌落中蘸取少量菌种，细菌接种在牛肉膏蛋白胨培养基上面，霉菌和酵母菌接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基与马铃薯蔗糖琼脂培养基上、放线菌接种在高氏一号培养基上进行划线分离.

F. 保存菌种 -1