微囊藻毒素LR对碱基切除修复基因和凋亡相关基因(2)

时间：2025-07-12

微囊藻毒素LR对碱基切除修复基因和凋亡相关基因mRNA表达的影响

微囊藻毒素（ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｓ，ＭＣｓ）是一组由水体中蓝藻类产生的，具有高度嗜肝性的单环七肽毒素，已发现有８０多种异构体，其中毒性大、分布广的微囊藻毒素ＬＲ（ＭＣＬＲ）最受关注。近年来，很多学者对ＭＣｓ致毒机制进行了大量研究。大多数研究表明，ＭＣｓ毒性表现与ＭＣｓ对蛋白磷酸酯酶１和

２Ａ（ｐｒｏｔｅｉｎ

ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ１

ａｎｄ

２Ａ，简称ＰＰｌ和ＰＰ２Ａ）的抑制有关。ＭＣＬＲ可通过抑制细胞外蛋白

磷酸酯酶的活力，影响细胞膜上的离子通道，使细胞内环境的稳态受影响而引起肝细胞的一系列损

伤和改变【１－２１。然而，近来另一些研究显示，ＭＣｓ致毒机制还与ＭＣＬＲ能引起肝细胞内活性氧（ＲＯＳ）的增加有关。研究结果显示，ＭＣＬＲ能引起肝细胞内

ＲＯＳ的蓄积，用ＭＣＬＲ处理细胞２４ｈ后，可以引起

８．羟基脱氧鸟苷（８－ＯＨｄＧ）水平明显升高，且染毒量与８－ＯＨｄＧ水平呈剂量一反应关系，这些现象提示ＭＣＬＲ能引起细胞氧化性ＤＮＡ损伤１３－Ｓ］。当ＤＮＡ受

到损伤后，细胞将启动修复系统对受损的ＤＮＡ进

行修复，如果损伤严重或修复系统受阻，受损细胞无法正常修复，细胞便启动凋亡系统促进细胞凋亡，如果凋亡系统同样受影响而无法正常启动凋亡过程，一些ＤＮＡ受损的细胞就可能逃避机体细胞正常凋亡机制而成为快速增殖的细胞，就有可能发生肿瘤。因此，细胞修复与凋亡系统功能正常对防止机体肿瘤的发生至关重要。但目前关于ＭＣＬＲ毒性与修复相关基因表达改变的关系少见报道，特别是对碱基修复通路上基因的影响还未见报道。因此，我们以碱基切除修复和凋亡相关基因为研究对象，通过对体外培养的肝细胞株进行染毒，并采用定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对细胞碱基修复和凋亡通路上重要基冈的ｍＲＮＡ表达水平进行检测，分析ＭＣＬＲ毒性对碱基修复和凋亡相关基因ｍＲＮＡ表达的影响，为进一步阐明ＭＣＬＲ毒性机制提供证据。

材料与方法

１．大鼠细胞株：大鼠正常肝细胞ＢＲＬ．３Ａ，购于

中国科学院上海细胞库。

２．试剂：ＭＣＬＲ（美国ＡＬＥＸＩＳ公司），ＭＥＭ培养基（美国ＨｙＣｌｏｎｅ公司），胎牛血清（中国杭州四季青公司），青一链霉素（加拿大ＢＢＩ公司），二甲亚砜

（ＤＭＳＯ，美国Ａｍｒｅｓｃｏ公司），噻唑蓝（Ｍ，ＩＴＩ＇，美国

Ｂｉｏｍｏｌ公司），乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）、琼脂糖粉末均为美国Ａｍｒｅｓｃｏ公司产品，质量分数为０．２５％的胰蛋白（美国ＧＩＢＣＯ公司），ＤＮＡｍａｒｋｅｒ、总ＲＮＡ提万方数据

取试剂（Ｔｒｉｚ０１）均为天根生化科技（北京）有限公司

产品，反转录试剂盒（加拿大Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司），

ＳＹＢＲ

ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ、引物合成均为日本Ｔａｋａｒａ公

司产品。

３．实验分组：按３ｘ５析因设计实验，ＭＣＬＲ染毒