背景：传统的HLA测序分型技术都是对父系母系双倍体进行扩增,由于HLA多样性高,产生了大量的模棱两可难题,而采用基于组特异性单倍体全长测序分型方法来解决模棱两可结果的确认定型鲜有报道。目的：分析基于组特异性单倍体全长测序分型方法对HLA基因分型模棱两可结果准确定型的效果。方法：对2例模棱两可结果标本以低分辨率分型方法结果作为参考起点,通过组特异性扩增分离,基于等位基因全长单倍体的Sanger测序(PCR-SBT)分型。

中国组织工程研究 第21卷 第20期 2017–07–18出版

Chinese Journal of Tissue Engineering Research July 18, 2017 Vol.21, No.20

P .O. Box 10002, Shenyang 110180

3208

·研究原著·

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王宋兴，1987年生，广东省揭西县人，汉族，2010年南方医科大学毕业，主管技师，主要从事组织配型与免疫遗传学研究。

通讯作者：邹红岩，主任技师，深圳市血液中心输血医学研究所，广东省深圳市 518035

并列通讯作者：徐筠娉，博士，副主任技师，深圳市血液中心输血医学研究所，广东省深圳市 518035

中图分类号:R318 文献标识码:B 文章编号:2095-4344 (2017)20-03208-08 稿件接受：2017-05-18

Wang Song-xing, Technician-in-charge, Institute of Transfusion Medicine of Shenzhen Blood Center, Shenzhen 518035, Guangdong Povince, China

Corresponding author: Zou Hong-yan, Chief technician, Institute of Transfusion Medicine of Shenzhen Blood Center, Shenzhen 518035, Guangdong Povince, China

Corresponding author: Xu Yun-ping, M.D., Associate chief technician, Institute of Transfusion Medicine of Shenzhen Blood Center, Shenzhen 518035, Guangdong Povince, China

基于HLA 组特异性单倍体全长测序方法对模棱两可结果的准确定型

王宋兴1，阳 辉2，何柳媚1，洪文旭1，邹红岩1，徐筠娉1 (1深圳市血液中心输血医学研究所，广东省深圳市 518035；2深圳市晋百慧生物有限公司，广东省深圳市 518035)

引用本文：王宋兴，阳辉，何柳媚，洪文旭，邹红岩，徐筠娉. 基于HLA 组特异性单倍体全长测序方法对模棱两可结果的准确定型[J].

中国组织工程研究，2017，21(20):3208-3215.

DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.20.016 ORCID: 0000-0001-5064-7917(邹红岩)

文章快速阅读：

文题释义：

单倍体全长测序方法：根据HLA-A 、-B 、-C 、-DRB1和-DQB1基因的组特异性分类，分别设计基因全长单倍型组特异性扩增引物对HLA-A 、-B 、-C 、-DRB1和-DQB1基因需要分型的外显子及内含子区域进行PCR 扩增；完成扩增后，为每个基因设计一套通用正反向全长测序引物对HLA 基因所有外显子及内含子进行测序。

模棱两可结果：所谓的HLA 模棱两可结果产生的原因可分为两类，一是等位基因的差异碱基位于测序范围之外；二是测序范围内不同等位基因碱基序列的组合可以获得相同的杂合序列。本文中的低分辨结果HLA-A*02杂合HLA-A*11就属于第一类，而HLA-C*08杂合HLA-C*07∶373就属于第二类。

摘要

背景：传统的HLA 测序分型技术都是对父系母系双倍体进行扩增，由于HLA 多样性高，产生了大量的模棱两可难题，而采用基于组特异性单倍体全长测序分型方法来解决模棱两可结果的确认定型鲜有报道。 目的：分析基于组特异性单倍体全长测序分型方法对HLA 基因分型模棱两可结果准确定型的效果。

方法：对2例模棱两可结果标本以低分辨率分型方法结果作为参考起点，通过组特异性扩增分离，基于等位基因全长单倍体的Sanger 测序(PCR-SBT)分型。

结果与结论：①2例模棱两可分型结果分别为A*02∶03∶01及C*07:02∶01∶01杂合新等位基因；②A*02∶03∶01杂合新等位基因与A*11∶01∶01∶01全长比较，在NT817由C 发生突变为T ；③C*07∶02∶01∶01杂合新等位基因与C*08∶01∶01比较，在NT879由A 发生突变为G ；④结果表明，以低分辨率分型方法结果作为参考起点，通过组特异性扩增分离，基于组特异性单倍体全长测序分型方法能准确定型HLA 基因分型模棱两可结果并发现新等位基因。 关键词：

组织构建；组织工程；基因多态性；HLA ；组特异性扩增；单倍体全长测序；模棱两可结果 主题词：

HLA 抗原；基因；组织工程 基金资助：

广东省医学科研基金(A2016222)；深圳市战略新兴产业发展专项资金(JSGG20160328103642937)；深圳市科技研发资金(JCYJ20160427172335974)；深圳市卫生计生系统科研项目(201401077)