根据GenBank中报道的猫白介素-18基因(IL-18)序列,对用ConA刺激的实验猫外周血单核细胞(PBMCf)进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR产物纯化后克隆入pMD18-T中得到重组质粒pTIL-18,进行核苷酸序列测定,并与不同物种的IL-18基因进行了序列比较。结果该基因全长579bp,编码1

第 2 期 乔 军等：猫白介素 ­18基因的克隆、 序列分析及其表达

201

图 5. 不同物种

GenBankaccessionnumberswereasfollows: 

Y11133  

NM_001009207  

基因的遗传进化分析

genes ofdifferentspecies 

TNI555459.

Fig.5.Phylogenetictreebasedonhomologyof 

NM_204608

有蛋白带。结果表明猫 在大肠杆菌中实现了

转化的

表达。凝胶薄层扫描结果显示， pETBL21(DE3)在 IPTG诱导 6h 后的 IL­18 蛋白的最高

表达量可占菌体总蛋白量的 13.6%。

图7. 重组质粒 pETdigestion 

M,DL­15000+2000 1,3,的酶切鉴定

byenzyme 

/ 

玉芋.

芋  

Fig.7.Identificationofrecombinant2,  4,图 6. 重组质粒pET的 PCR鉴定

byPCR 

Fig.6.IdentificationofrecombinantM,DL­15000+2000 1and2,positiverecombinant3 讨论

人 IL­18 于 1996 年首次被克隆（Ushio （Dinarello， 1999； Gardella 

，它是由激活的单核细胞及巨噬细胞产生 1996）

。Ushio ， 1999）

(1996) 用 Northern 杂交技术对成年人不同组织的

图8. 猫

基因在

DE3(BL21)中的表达 genein 

DE3(BL21) 

4~8, 

mRNA 进行分析，结果发现胰、肾、脾和骨骼肌

mRNA 含量较高，肝和肺中也能检测到。 Okamara etal.(1998) 发现肝 Kuffer 细胞

这与有无 LPS 刺激无关， 但单 mRNA 表达量较高，

核细胞只有当 LPS 刺激后才有高表达。在分子组 成，鼠

前体蛋白由 192 个氨基酸组成，分子

Fig.8.Expressionoffeline 

M,standardproteinmarker 1,BL21(DE3)transformedbypET28a  2and3,uninducedBL21(DE3)transformedbyinducedBL21(DE3)transformedbypET

arrowindicates27.5 ；

与鼠 有 65%同源性，也没有糖基化位点和疏

都有

无 N­ 联糖基化位点、 无野生型疏水信号肽 23.8kD，

样位点。人 基因编码 193 个氨基酸前体蛋白，

水信号肽位点。在分子结构上，鼠和人

即 phe­x(12)­phe­x­ser­x(6) IL­1 类似的特征性结构，