根据GenBank中报道的猫白介素-18基因(IL-18)序列,对用ConA刺激的实验猫外周血单核细胞(PBMCf)进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR产物纯化后克隆入pMD18-T中得到重组质粒pTIL-18,进行核苷酸序列测定,并与不同物种的IL-18基因进行了序列比较。结果该基因全长579bp,编码1

农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiotechnology2007,15(2):198~202 

· ·研究论文

猫白介素 ­18基因的克隆、 序列分析及其表达 * 

 3 

乔 军 1，, 夏咸柱 1 **, 杨松涛 1,2 , 鞠会艳 1,2 , 黄 耕 1

（1.解放军军事医学科学院军事兽医研究所,长春130062 2.吉林大学农学部,长春130118  

3. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州 730046) 

摘要：用猫白介素18(interleukin, （ConA） （PBMCf） 刺激后猫外周血单核细胞 总 RNA进 基因特异性引物对刀豆蛋白

但存在 4 个 Cys 氨基酸序列中， 无信号肽序列和潜在的N­ 联糖基化位点，

分别为 89.8%、 88.6%、 88.4%和

)表达载体 pET28a

行了RT­PCR扩增， 并将扩增产物纯化后克隆入 pMD18­T 中进行核苷酸序列测定。结果该基因全长 579bp， 编码 192 个氨基 酸(GenBank登录号： DQ100372)。在推导的猫 残基。与不同物种 但与小鼠和鸡 88.1%，

中构建了重组质粒 pET相比，

与犬、 羊、

有明显的种属差异。将目的基因片段进一步亚克隆到大肠杆菌转化大肠杆菌 BL21（， 并用IPTG诱导。结果重组菌菌体裂解物经 SDS­PAGE 电泳可检测 DE3）

目的蛋白表达量可占菌体蛋白的 13.6%。 到分子量为 27.5kD的重组目的蛋白。经凝胶薄层扫描，

关键词:猫白介素­18基因； 克隆； 序列分析； 大肠杆菌表达

中图分类号： S188 文献标识码： 文章编号：A 1006­1304(2007)02­0198­05 

CloningandSequenceAnalysisofFelineInterleukin­18 GeneandItsExpressionin 

  1,3 1 1，2 1，2 1 

QIAOJun ,XIAXian­zhu **,YANGSong­tao ,JUHui­yan ,HUANGGeng 

Accordingtofelineinterleukin­18genesequencereportedinGenBank,feline genewasamplifiedby 

genewas579 

RT­PCRfromthefelineperipheralbloodmononuclearcells(PBMCf)stimulatedbyconcanavalin(ConA).ThePCRproductwas purifiedandligaturedwithpMD18­T.Therecombinantplasmidwasusedforsequencing.Thefulllengthoffeline paredwith nucleotide sequenceoffeline GenBank.Meanwhile,thefeline wasfurthertransformedinto of

gel scanning. 

felineinterleuk­18gene cloning sequenceanalysis expressionin

geneshares89.8%、 88.6%、 88.4%and88.1%identitieswith 

and porcinerespectively,butdisplayssignificantdifferenceswithmouseandchicken 

bp,whichencoded192aminoacids(GenbankaccessionNo.DQ100372).TherewerenosignalpeptideandN­glycosylationsites, 

genesofotherspecies,the genesofcanine,ovine,bovine genesequencewhichpublishedin 

genewassubclonedintotheprokaryoticexpressingvectorpET28aandrecombinantvector 

strainBL21(DE3)forexpressionundertheinductionofIPTG.TheresultsofSDS­PAGE 

revealedthatithadamolecularweightof27.5kD,whichamountsto13.6%inthe totalproteinoftheinducedbacteriabytheassaying 

白细胞介素 18 (interleukin­18, 子 （Okamura

最初是从 INF­酌， 故将其命名为干扰素 酌诱导因子( Interferon gammainducingfactor,IGIF)。随后的研究表明，

IL­18 分子结构类似于 IL­21 家族而功能类似于

中毒性休克的小鼠肝脏发现的一种细胞免疫调节因

， 1995） , 它能诱导 Th1 等细胞分泌

* 基金项目： 国家林业局野生动植物保护司资助。

** 通讯作者。AuthorforCorrespondence. 中国工程院院士， 博士生导师， 主要从事动物病毒学研究。

Tel： 0431­6985518 E­mail:<xia_xzh@>. 2006­04­10 接受日期： 2006­05­18 收稿日期：