将浓盐酸500ml加水至1000ml。A.5.66N的氢氧化钠溶液

称取240g的氢氧化钠，用水溶解，并加水至1000ml。A.5.7羟脯氨酸标准液

称取羟脯氨酸结晶，溶于0.01mol/L盐酸中，配制成0.1mg/ml的溶液，使用前作10倍稀释。A.6A.6.1A.6.2A.6.3A.6.4A.6.5

胶原蛋白的消化

安瓶的准备：5ml安瓶用蒸馏水冲洗干净，烘干后备用。安瓶的准备：5ml5ml安瓶用蒸馏水冲洗干净，烘干后备用。

，加6N的盐酸溶液10.0ml，在煤气火焰上于5ml安瓶内加入精确称取的I型胶原蛋白10mg10mg，加的盐酸溶液10.0ml10.0ml，在煤气火焰上℃24小时，取出冷却至室温。置恒温箱内加热并保持110110℃24小时，取出冷却至室温。

2-3次并转入容量瓶中。将安瓶内消化液小心移入100ml容量瓶中，用少量蒸馏水洗安瓶容量瓶中，用少量蒸馏水洗安瓶2-36mol的氢氧化钠到溶液呈粉红色为止，加蒸馏水至刻度，并摇匀。加酚酞指示剂2滴，加滴，加6mol

将安瓶熔封。

A.7测定步骤

A.7.1按下表制备羟脯氨酸标准液系列

管号

羟脯氨酸标准溶液加量，ml

无水乙醇，ml羟脯氨酸含量，ug/ml

A.7.2A.7.3A.7.4A.7.5A.7.6A7.7A.8

002.50

10.12.41

20.22.32

30.42.14

40.61.96

50.81.78

61.01.510

样品置于样品管中，加入1.5ml无水乙醇。样品管的制备：从容量瓶中取1ml1ml样品置于样品管中，加入样品置于样品管中，加入1.5ml，混合，室温下静置20分钟。于标准液系列各管和样品管内各加入氯胺T溶液1ml1ml，混合，室温下静置，室温下放置5分钟。加入过氯酸溶液1ml1ml，室温下放置

1ml，混合后轧盖。60℃加热20分钟后，置水中冷却。加入对二甲氨基苯甲醛溶液加入对二甲氨基苯甲醛溶液1ml1ml，混合后轧盖。，混合后轧盖。6060℃20分钟后，置水中冷却。

0号管作对照，测定各管在560nm处的吸光度。各标准打开分光光度计，预热30分钟后，用分钟后，用0号管作对照，测定各管在560nm根据标准曲线计算样品管的羟脯氨酸含量。蛋白中羟脯氨酸含量的计算

蛋白中羟脯氨酸含量C0（%）=C1×10/（m×C）×100%式中C1--样品管中羟脯氨酸含量；

m--样品的实际重量（mg）；C—样品中蛋白质含量(%)。

管的含量和吸光度回归后所得的标准曲线的相关系数r≥0.99时才有分析价值。