氨基酸分析测定及衍生化方法_吕莹果

HPLC 的使用之一

氨基酸分析测定及衍生化方法

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吕莹果1，，张　晖2，孟祥勇2，陈能飞3

（1. 河南工业大学粮油食品学院，　河南郑州　450001；2. 江南大学食品学院，　江苏无锡　214122；

3. 广州江大和风香精香料有限公司，　广东广州　510660）

摘　要：该文综述氨基酸分析方法进展和分类，并对柱前衍生化RP–HPLC分析氨基酸方法及常

用衍生化方法进行比较和探讨。关键词：氨基酸；衍生化；RP–HPLC

Methods for amino acid analysis and derivatization

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LV Ying-guo1，，ZHANG Hui2，MENG Xiang-yong2，CHEN Neng-fei3

（1. College of Grain Oil and Food，Henan University of Technology，Zhengzhou 450001，China；2. School of Food Science and Technology，Southern Yangtze University，Wuxi 214122，China；

3. Guangzhou ADD Co.， Ltd.， Guangzhou 510660，China）

Abstract： Development and methods of amino acids analysis were reviewed in this paper. Pre–column

derivatization in high–performance liquid chromatography for amino acids determination was especially introduced. And several common derivate agent was listed.Key words：amino acids；derivatization；RP–HPLC中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1008―9578（2009）07―0035―04

自然界氨基酸主要有两种存在形式，一种是以游离态存在于生理体液（血浆、尿）、食品（酒、饮料）中；另一种是以结合态存在于肽和蛋白质中。基于氨基酸对人类生活重要性，氨基酸分析一直是分析领域研究重要课题之一。氨基酸分析在蛋白质化学、生物化学、食品科学、临床医学等领域研究中起着重要作用，因此，对氨基酸分析方法研究与改进得到人们高度重视。本文对氨基酸分析测定及常用衍生化方法作一综述。

1 氨基酸分析方法发展

1954年，Hirs、Moor、Stein〔1~2〕，较早提出采用磺酸盐离子交换树脂分析氨基酸，并在此后几年将此项技术进一步发展。1958年，Spackman、Moor、Stein合作〔3〕研制出世界上第一台用离子交换树脂和柱后茚三酮衍生检测法的自动氨基酸分析仪，使氨基酸定量分析进入一个崭新阶段。20世纪60至80年代，氨基酸分析的速度、灵敏度、自动化程度均大大提高〔4~9〕。20世纪80年代中后期，柱前衍生方法已逐渐占据主导地位，其中，激光诱导荧光检测器应用，使检测灵敏度提高到一个新的台阶〔10〕。20世纪90年代戴安公司开发AAA–DirectTM氨基酸分析系统，采用积分脉冲安培检测器直接检测。近年来，对氨基酸分析引入质谱、核磁与HPLC联用技术，大大提高定性分析准确性〔11~13〕。

2 氨基酸分析方法

对氨基酸分析，按是否衍生可分为两大类：一类是直接分析法；另一类是衍生化间接分析法。2.1 直接分析法

近年来，氨基酸直接分析法得到迅速发展，基于离子交换色谱的氨基酸分析仪已成为直接分析法主流，采用高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法（HPAEC–IPAD），戴安公司上世纪推出氨基酸AAA–DirectTM系统就是此种方法代表。此法可同时对一级和二级氨基酸进行检测，无需柱前、柱后衍生，直接进样分离效果好、灵敏度高、操作简单；但此类氨基酸分析仪专属性强，价格昂贵，大大限制其推广与应用〔14~15〕。2.2 衍生化间接分析法

由于氨基酸种类较多，结构相近，大部分没有紫外或荧光响应，为提高分析检测灵敏度和分离选择性，将氨基酸衍生化，接上发光或发色基团，再进行定性定量分析，此种方法称为衍生化间接分析法。衍生化间接分析法按衍生时间不同分为两大类：一种是柱前衍生法；另一种是柱后衍生法。

在线柱后衍生是将样品组分先经色谱柱分离，再进行衍生化处理并检测过程。常用衍生试剂，如茚三。柱后衍生技术与柱前衍生技术相酮、邻苯二甲醛〔16〕比则有以下优点：反应重复性好，未被衍生化合物若

收稿日期：2009–05–15基金项目：国家自然科学基金项目（20671044）“；新世纪优秀人才支持计划”项目（NCET–06–0488）作者简介：吕莹果（1982~ ），女，博士，主要从事谷物功能成分研究。