胸腺肽β4在小鼠卯母细胞和早期胚胎中的表达与(7)

2009;36(9)张岩等：胸腺肽鄄茁4在小鼠卵母细胞和早期胚胎中的表达与分布规律

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生GVBD阻断和不能排出极体的卵母细胞中，

Tb4mRNA的表达量增高，与正常成熟卵母细胞有显著的差异．从受精合子发育到囊胚的过程中，Tb4mRNA的表达量逐渐升高，其中在2细胞胚胎时期表达量出现一次高峰，而在囊胚时表达量达到最高值．

Fig.8RelativeexpressionofTb4mRNA(2s)inmain

stagesofoocytesmaturationandembryonicdevelopment

1～11:ThesameasFigure7.Thegroupswithsignificantdifference(P<0.05)werenotedwithdifferentlowercaseletters.

3讨论

Tb4是一类参与众多生理与病理活动的多功能小肽类因子，但其主要的作用是能够与G-actin结合，使其失去聚合成微丝的能力，即参与G-actin的活性遮蔽作用，因此Tb4等多肽物质常被称为遮蔽因子．细胞微环境中非遮蔽状态的G-actin浓度水平能够直接影响微丝活动的效果，使之倾向于聚合或是解聚．当遮蔽因子与G-actin结合后，使后者失去了重新聚合成微丝的能力，从而提高了原有微丝的解聚效率；反之去除遮蔽因子的作用有利于胞质微丝的聚合．

胸腺肽-茁4不仅限于在胞质中执行G-actin的活性遮蔽功能，而且在细胞核中也有分布．Radoslaw等[18]研究表明，Tb4在细胞中具有广泛的定位特性，将Tb4酶解后，C端片段只能定位于细胞质，中段能够与G-actin结合，而N端片段能够定位于细胞核当中．并且有相关文献报道，肌动蛋白在核内是以非常规的聚合形式存在的，其与细胞核结构组成和核功能执行密切相关[21,22]，因此与微丝相关的细胞核活动也需要G-actin遮蔽因子的调节．另有实验证据表明，Tb4与其他一些因子共同作用，能够调节细胞核的解离、组装与形态变化，并且还与DNA的转录和复制活动密切相关[23～25]．

Tb4还能够结合多种因子而产生配体作用，能够结合细胞膜性受体或核内受体，产生信号转导和调控DNA转录或复制的作用，如DNA解旋酶域的激活就与该分子有关[17,18]．综上所述，Tb4在细胞核中的定位表达有着重要的作用与意义．

以往较多报道均证实Tb4在细胞核、质中具有广泛的表达．Yu等[26]采用放射性自显影方法研究表明，在非洲爪蟾的卵母细胞胞质和细胞核中均有该蛋白质的分布，且分布量较为均一．而Huff等[27]在研究MCF-7细胞系的报道中认为，Tb4的定位分布特点存在着与细胞生长状态相关的显著差异．

本试验通过小鼠卵泡免疫组织化学结果证实，

在卵母细胞体内成熟过程中，Tb4蛋白在胞质中处于积累状态．但是RT-PCR结果显示，体外成熟过程中Tb4mRNA的表达水平上没有显著差异，只是在发生GVBD阻断和没有排出极体的卵母细胞中，mRNA的表达量有所升高．说明卵母细胞在体外成熟受到影响时，Tb4mRNA处于激活转录状态．通过激光共聚焦结果分析，Tb4蛋白在卵母细胞和早期胚胎的胞质和细胞核当中均有规律性的表达．我们认为Tb4在细胞核、质中的分布变化现象能够对核、质两处中遮蔽因子的浓度进行调节，胞质中高浓度的Tb4多与调节微丝解聚过程有关．而伴随细胞质中微丝聚合过程，Tb4往往向细胞核内转运，从而解除G-actin活性的遮蔽作用，以促进微丝的聚合效率．Tb4的这种核、质定位差异现象与细胞所处的发育阶段和增殖状态密切相关．针对与Tb4细胞核定位的研究发现，Tb4在核膜破裂和重组的过程前后于细胞核膜处有大量的凝集，证明其在细胞核形态变化、分解和重组过程中有重要的作用．但在各阶段核仁结构中均无Tb4蛋白的表达，说明其与核仁功能执行并无密切关系．Zucotti等[28]报道，不同染色质构型的GV期卵母细胞的发育潜力具有差异，一般认为染色质构型的差异与细胞核成熟程度密切相关．本试验获得的相关结果证实，Tb4在不同染色质构型的GV期卵母细胞中的表达定位也有所差异．

我们认为Tb4蛋白的表达定位规律还与细胞所处周期有关．我们在另一研究中发现，处于G1期的MEFs细胞核中有较高水平的Tb4蛋白表达，而在S期表达量显著降低．这一结果与本实验若干现象相符，例如Tb4在早期2-细胞与早期8-细胞胚胎细胞核中表达强度较高，而在晚期细胞核中的表

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生物化学与生物物理进展达量降低．这可能与细胞周期有关，因为晚期细胞处于S期或G2期．

在桑椹胚和囊胚阶段，Tb4总体表达量急剧增加，并且在处于细胞分裂中期的细胞质当中，该蛋白质的表达水平极高．而在早期着床囊胚中，Tb4蛋白在着床侧细胞表达水平较高，说明Tb4能够调节胚胎着床过程中的微丝解聚活动，因此其对小鼠胚胎着床也有着重要的意义．综上所述，Tb4在小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程中，存在差异性的表达和定位变化，能够对细胞微丝活动和细胞增殖等方面进行调节．因此Tb4对卵母细胞成熟、早期胚胎发育以及胚胎着床等过程均有重要的作用．

参

考文献

1

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vertebrateclasses.ArchBiochemBiophys,1983,225(2):4Hann …… 此处隐藏：4291字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……