抗 CD20 嵌合抗体的表达与活性检测(5)

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中国生物工程杂志6N*E(@*/<ODNE/F/KP

间接细胞$%&’(检测抗体对)*!+的亲和性

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各检测孔吸光度(.123.-450260-578/29

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!"#$%检测结果见表&。以’()*、+(,-*、

其各检测孔与阴性对照孔’(./,01种细胞为抗原，

相比，说明该抗体可与2+345值均有明显差别，

6+&57细胞发生结合。检测表达抗体与6+&58细胞结合情况的实验表明该抗体与9,:;(<基本不结合、与=">5以及?@A6部分结合（资料未显示），与文献报道相符，说明该抗体能够与6+&5抗原发生特异性结合。

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基因工程抗体对)*!+;细胞的杀伤作用

实验结果发现，在抗体浓度为5、5G4、4、45KL.F!的条件下，引发了不同程度的细胞凋亡与死亡，并且随着抗体浓度的增加，杀伤效应也随之增强，见图>

。

图<

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蛋白浓度依次为+、-=>：+":、:、:+?@A/引起的细胞凋亡荧光显微照片；!

细胞凋亡死亡百分数随抗体浓度的增加而增加0：

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H讨论

达水平存在较大差异，往往导致完整抗体分子表达

B&］

。本试验采用双表达载体表达抗体分水平极低［

国内外许多研究表明，针对6+&5的抗体可有效杀伤@淋巴瘤细胞，对多种@淋巴细胞功能紊乱的疾病有较好疗效。与鼠抗相比，嵌合抗体既保留了鼠源可变区的高亲和性，又具有人MD段的多种

免疫杀伤功能，降低了人抗鼠抗体反应的发生率，改善了临床治疗效果。与其它小分子基因工程抗体相比，嵌合抗体作为完整抗体分子，在体内半寿期更长，并具有人MD段的多种免疫杀伤功能。

提高完整抗体分子的表达量必须同时提高轻链和重链的表达。目前表达抗体分子有两种方式：一类是将轻、重链基因分别连接至不同表达载体，一类是轻、重链基因连在同一载体上但处于不同的表达单元中。使用这两种表达方式，由于轻重链表

子，使轻重链基因处于同一表达单元之中，从而有利于轻重链基因表达水平相当，且同一细胞同时表达轻重链，有利于完整抗体分子的正确折叠。

抗体在体内通过多种途径发挥免疫杀伤作用，其完整与确切的作用机理至今仍不完全清楚。目

J，B5］

报道抗6+&5嵌合抗体的作用机前国内外文献［

理主要包括：抗体依赖的细胞毒作用、补体依赖的细胞毒作用以及抗体与6+&5分子结合引起的直接效应（包括抑制细胞生长，改变细胞周期以及凋亡）。抗6+&5嵌合抗体还可通过致敏肿瘤细胞协助增强传统细胞毒性药物的疗效。细胞因子对改善它的疗效也有一定作用。本实验研制的嵌合抗体已初步证明具有杀伤细胞的活性。