T WL E测试结合人体斑贴试验预测皮肤刺激作用宁岭，华伟光 (上海家化联合胶份有口公司科研的，上海 2 2 0

摘要：比较人体斑贴试验与皮肤表皮水分丧失测定仪 (E L Twmt T 20 TW仪一 eaer 1)对皮肤损伤程度的检侧 e M敏感性。结果表明，在检测皮肤损伤方面，人体斑贴皮肤刺激值 (S V )能较好地反映皮肤刺激程度，而

TW值的增加能更敏感地反映由于皮肤屏障破坏而造成的皮肤刺激作用。 EL关扭词：皮肤刺激；人体斑贴试验；表皮水分丧失〔E L TW )

化妆品是健康人在没有医 生指导下自使用的己一种个人护理用品，安全性是必须具备的要素「。而‘〕今，“安全性”也作为一种利益，成为某些品牌的市场诉求点。评价化学物质皮肤安全性的试验方法很多，人体皮肤斑贴试验较为常用。以其优点是将人体作为受试对象，较体外试验和动物试验更为直接，用于对产品最终配方使用安全性的判定具有十分有效性和权威性。但常规的人体斑贴试验方法对于一些化妆品或配方，在正常使用情况下对皮肤的弱刺激作用不能很好的预测。许多学者在这一领域进行了大量的研究，提出使用一些敏感的仪器检测指标进行评价，其中认可的是测定表皮水分丧失 (E L较为 TW )来客观

用加样器准确将上述浓度的S 0 2 I . m滴于F n S l 0 i n小室中心圆形凹槽纸片上，然后敷贴于受试者前臂内侧， 4 2h后移去试验物，于半小时后观察结果， 4 2, 4小时重复观察 (小时斑贴试验) 8 2 4。 S I S浓度与敷贴方法同上， 4 2h后移去试验物，于半小时后观察结果，再次敷贴，2 h 4后移去试验物，于半小时后观察结果，然后于2,小时重复 44 8观察 (小时斑贴试验) 4 8。 1 .皮肤反应判断标准 .4 1参照国际通用的四级评分标准[ 1表 I评判 5 ( ), 6皮肤反应表 1皮肤反应评分标准 刺激积分值 (S V)皮肤反应无皮肤反应

评皮激反应[1我们在以作的价肤刺[。 2, 3前工基础上，结合人体斑贴试验，进一步探讨了TW预测化妆品 EL的皮肤刺激反应[ 4 11对象和方法 11不同浓度 S . L S的皮肤刺激反应

1 . ' b . 1

10 20 30

勉强可见红斑，范围小于1面积/ 2轻度红斑，范围大于 1

面积 / 2明显红斑，全部范围 严重红斑，全部或超出范围

1 .受试对象 .1 1健康志愿者2名， 6年龄2一 5所有志愿者 3 4岁，均无皮肤疾患，试验部位的皮肤完全正常，试验期间停用任何外用药物，无服用任何皮质类固醉激素或抗组胺药物史。 11材料 .. 2 S (dm y uhe lr sp t十二烷基硫酸钠) L si a l a, S u u l o纯度〕9% S M ) 9 (I A,用蒸馏水分别配置成含 G 00 . 3%, .%, 2 00 6 01 . 5%,02 . 5% ( )的水 WV/溶液作为试验物。斑试器为仿 F n i小室 ( n由南京医科大学附属医院皮肤科生产),固定胶带为 Mc- i o r sp M低致敏外科用胶布 (M ce oT 3) 11斑贴方法 .. 3作者简介：宁岭，女，(92,毕业于中国药科大学，工程师。 17 -)

1 .表皮水分丧失测量 .5 1对斑贴皮肤刺激情况进行临床观察的同时， 使用皮肤表皮水分丧失测定仪 (E L仪一T aer TW e mt w e T 20德国C K M 1,+公司生产)测试正常皮肤和斑贴，部位皮肤的」W值。测试在恒温恒湿条件下进行。 EI

TW值的量位 . *r o EL计单是gm2h ' - -1 4种产品的斑贴临床观察与TW测定的关系 . 7 2 EL分析

对4种化妆品产品分别进行人体斑贴试验和 7 TW仪测定， EL方法同上。试分析临床观察的刺激积分值 (S V )与TW值之间的相关性。 EL

19 1

2结果

21人 .体斑贴皮肤刺激值 (S V )及TW测定值与 EL s刺激剂量的 l s关系比较受试者在移去试验物半小时后，肉眼观察皮肤的 红斑反应，同时测定TW值。 E L人体斑贴临床观察以刺激积分值 ( s v )表示，TW E L结果以斑贴部位 TW值与正常皮肤TW值的比 El EL值表示。 21 S浓度和刺激反应强度的剂量反应关系比 . 1 S . L

图t 4种产品的v值和TW显示， 7 s E L比值之间有密切关系，经统计学处理，二者之间呈线性相关(= . 0 P 00 ) r 05, .1 0< 3讨论

十二烷基硫酸钠 (L)是洗涤剂成分，一定浓 S S度的A作用于皮肤可导致皮肤损伤， S诱发炎症，表现为局部真皮小血管扩张，血流量增加；同时，由于皮肤损伤，皮肤表皮的屏障功能发生破坏，渗出皮肤的水

分增多。一般而言，刺激浓度越大，炎症越重，较：渗出皮肤的水分越多。本研究用不同浓度的SS L水溶表2 随着S刺激剂量增高，显示， L S两组皮肤的液对2例人体皮肤进行原发刺激， 6斑贴不同时间 v值和TW比 s E L值相应增高。统计学处理显示从低 ( h 4 2 h, 2及2 h 4观察皮肤反应程度， 4十 )并测定受浓度到高浓度 (.%一 . 03 0 0 5%) 2斑贴2 h V值 4 S,试部位 TW值。斑贴2 h EL 4,临床观察皮肤刺激值和TW比值与浓度之间的相关性有非常显著意义 EL V)与TW比 E L值均呈现很好的剂量反应关系，同 (8 ) 091, 0 1 rW2= 8, N(= . 7 P< ., I1 0 7 P< (S 2 4 9 0 r ( E ) . 7 9时厂T L E比值与 V值之间存在高度正线性相关， W S 00)斑贴4 h V值和TW值与浓度之间的相 .。 1 8 S, EL EL L刺激引起的皮关尽较弱，有显著性管但亦意义 (S)。 8,这进一步说明TW能够客观量化SS r(二 .0 P V4 9 7 8肤亚临床红斑反应，这与以往的文献报道一致。本文< ., y4二 . 1, 0 50 0 5 r L8 0 77 P . ) 0 m ( 1 ) 7> 0也注意到斑贴4 h TW 8 E L比值一，反应线性相关程度 21 TW比值与皮肤刺激积分值 (S . 2 L . E V )的关系不如前者。比较： 4种化妆品的人体斑贴试验 TW比值与 V值 7 EL S表2 斑贴2 h TW比值的变化与 V值显示， 4 E L, S之间具有良好的相关性， E L值与 V值之间正 TW比 S密切相关。临床红斑反应越重， E L值越高。直 TW比相关。线线性相关分析显示TW比 E L值与 v值之间有高度 S根据实验发现， 对于由受试物引起的皮肤损伤，线性相关关系 (4 0 9, 00) r二 .3 P .。而斑贴4 h 2 99< 1 8,皮肤水分屏障功能 (E L TW )的变化相对较为灵敏。这种相关性却并不明显。衰2 E L比 TW值与v位与不同浓度 S S l s的关系一方面，人体斑贴试验TW比 E L值与人体斑贴临床观 Tb 2 a .察值 (S V )之间具有良好的相关性；另一方面，注皮肤斑贴4 h 8意到在无临床红斑反应 (S 0 V二 )的产品中，TW EL皮肤斑贴 2 h 4 l浓度 s5比值也有不同程度

的变化，说明TW比 E L值能够反映 (%) V S TW比 EL值 V W比 S T L值 E早于红斑显现前的皮肤水分屏障功能方面的皮肤状况 23 t 8 .8 .1 0 0伪 . 01 .0 20 t 5 .4 .9 0 00 .3。伪‘ 01 .302 .5 01 .1 01 .6 0.0 2

2 1士06 .2 .8 22 3 7 .7 .7 02.2土0 7 4 .4

。.价0.4 1 0. 2 3

26 t 9 .3 .1 0 32 .5 . t 2 1 30土1 t .3 . 6

改变。人体斑贴试验在实际应用中受到多种因素的影 响，如斑贴时间、季节、受试物的刺激强度、剂型

2 4种产品的人体斑贴皮肤刺激值 (S . 7 2 V )与 TW比值的关系比较 EL0 5 . r

(s A )划能窟类侧n卜卜U『U

等。同时，本试验提示， E L TW仪测试应避免在夏季进行，且测试应在恒温恒湿条件下进行，受试者在进行测试时，应预先保持心态和心情稳定。参考文献：〔〕 . B 1 DA a . - d e k s Si- t t: eetn[ . mt - k i i i d ar t Iea n m o a s s n fe n J n i t l t o n

.

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二

aJ m fC mt cne 19 ( ) 1一10 o seiSi c, 8 0: 1 5 . t d o c e o u 9 2 4

添了2

[ F K ia, lIvo a n e妙t n iavnt 2 . pr ea n elt imn w onse - 1 o e t i vui n n e: v a o n vi w n ha o吕田 .山 m e h rr t ae pyc园 d o dft s h e m u a efnm r sa m i m i f h il r t”. l sndit 1. m t l o i d c,, [] Ie e eJ C- t S m e 1 1 1:四」 ni a- f i c n i . t o n c 9 9 3一引 2

[ Prel Y R vr e. hn n l ut sn t o 3 ee, ii, l m- t e l i o k iit 1 o . o t v a: e v ao f r an a n i ri

TW比值 EL

[ . m i& l e 9,川： 9 4

ts o t s 1 6 J Cse 1 o c Tir, e i 9 3一 2[ 1华伟光， 4林惠芬等.皮肤刺激的仪器评价「1日 J用化学工业，20, 5一5 2 01 5 1:

图 1红斑与 T WL的关系 EF . i 1 g10 2

【 5〕A D Gile oCr C tt at[ A . d is a f o e D ns u en f o n n - i刀.Cn t -U e r ot a s e - -

5一7 i t . 8 . s 1 8 I 0 9 S 6

「 6)Bse, Git H, n X ea I ida en ad a t D k A r h A W g t nv ul t i n f s i f a M, l d i, c . h

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r viiy rat eil osn t ipci f a aal iit sc ti k h mlao o rbi n n u pbi f e itn t r i s y t i19 3 2一 ,: 8 96 5 0

C mpr o s d o h snivy aue n o uy te sit mesrmet o ai n s t f e t i f si ea ai kn l t n一h ma pt t t rneiema w t l s vu o u n c e&T a spdr l e o a h a a r sN G,爪A一 1 8 I Lg/Wi 8了 N i n e川(e n e oRsr& epe S n aJn C. d, h g i a) Dp mn f ah e lmn h g i o, S n a2o 2 s t e c Dvo t h a- f a e a i A h oo

A sa: s sitma r et ii ti场Twmt T 20 Hmn c Tsh b n i . b c Te i i e u mnosn ao r t t h e t y s n v e f r tn eaer 1 a u a P h t e sdd Te k r i e M n d a e a e te h t s u e a h ce h t u a Pt e v u e h er ot k iitn l e r, Twm t T 20 rer i it t t H mn c Tse l t t dg e h sn ti wlig e l bt ae r 1 s c n as h d a e ah t as e f i r ao e n

a u e a e e r n e M c d bt i￣ we sn rr erre s cil. a o e n n e r t h k b i idt o t p i ay n a e s i ad f l i r e e c Ky d: iti; a p c tt T n p en wt ls e w rs sn ao hmn h; s ina ar o k r tn u i r i a e t e d l o t a a e s

1 21

TEWL测试结合人体斑贴试验预测皮肤刺激作用

作者：作者单位：

宁岭， 华伟光

上海家化联合股份有限公司科研部(上海)

1.会议论文 华伟光.宁岭 TEWL测试结合人体斑贴试验预测皮肤刺激作用 2002

比较人体班贴试验与皮肤表皮水分丧失测定仪(TEWL仪-Tewameter TM210)对皮肤损伤程度的检测敏感性.结果表明,在检测皮肤损伤方面,人体斑贴皮肤刺激值(VS)能较好地反应皮肤刺激程度,而TEWL值的增加能更敏感地反映由于皮肤屏障破坏而造成的皮肤刺激作用.

2.期刊论文 杨晓冉.郑洪艳.董益阳.王军兵.Yang Xiao-ran.Zheng Hong-yan.Dong Yi-yang.Wang Jun-bing 五种化妆品的皮肤刺激性:平皿法鸡胚试验评价 -中国组织工程研究与临床康复2009,13(29)

背景:评价化妆品皮肤刺激性,传统多采用兔皮肤刺激实验,即将化学物涂抹在动物背部去毛的皮肤上,观察其变化,这些方法费时,费力,且给动物带来很大痛苦.各国实验室都在寻找动物替代实验的方法.目的:采用平皿法鸡胚试验方法作为替代方法评价化妆品引起人体皮肤不良反应潜在可能的可行性.设计、时间及地点:动物替代实验,于2008-03/05在中国检验检疫科学研究院毒理学实验室完成.材料:无特定病原体级受精鸡卵,购于北京梅里亚通实验动物技术有限公司.方法:将鸡胚置于平皿中,孵育第8天用于试验,记录出现出血,血管裂解及凝血的鸡胚数目,得出刺激因子X,以判断待测物质是否具有人体皮肤不良反应潜在可能.并与人体斑贴试验结果进行比较.主要观察指标:刺激因子X.结果:5种化妆品中2种有人体皮肤不良反应潜在可能,刺激因子X＞5.与人体斑贴试验结果经校正x2 检验比较,差异无显著性意义,其灵敏度、特异度、阳性预测价值、阴性预测价值均为1.结论:平皿法鸡胚试验和人体斑贴试验的结果一致,该方法可以用来评价化妆品的皮肤刺激性.

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