【刑事侦查档案】法医学(14)

多态性分析。可以检测出许多高变区，产生相应的谱带，所得到的图谱具有高度个体特异性，如同人类指纹一样的高度专一，所以被称为DNA指纹图。

法医学应用的DNA 分析技术主要是DNA分子杂交技术和DNA聚合酶链式反应、而分子杂交技术包括萨森印迹杂交核斑点杂交以及凝胶原位杂交。分子杂交是指不同来源的核酸单链按碱基互补原则，通过碱基配对，以非共价键联接形成杂合分子双链。法医学检测生物检材中的DNA是将待测的DNA分子切断，得到长度不同的DNA(蟹)片断、将其双链变性成为单链，使该单链DNA与标记的探针杂交、形成杂合DNA双链、通过放射自显影或者现色反映显示出待测DNA分子中不同的长度片断。






萨森印迹杂交技术

萨森印迹杂交主要技术程序

1 提取DNA：人类DNA主要以染色体形式存在于细胞核内，称核内DNA或者基因组DNA有少量存在于线粒体中，称线粒体DNA。反射含有人体有核细胞的检材，如人体器官组织、精斑、唾液斑、阴道分泌物等均可以做为提取DNA的检材。

2 DNA的限制性内切酶消化：一种限切酶只能对DNA 分子内一定碱基序列中的一定位置发生作用，使它裂开。成为长度不等的若干片断。选择的限切酶要与使用的DNA探针配合得当，以便能有效地检出限制性片断长度多态性。

3 DNA(蟹)片断电泳：被酶解后的DNA即按片断长度从大到小彼此分离。DNA(蟹)片断长度与在电场中迁移速度成反比，较长片断比较短片断一定缓慢。最后形成由大到小排列的一些列等为基因条带。

4 凝胶上DNA的碱变性：电泳后凝胶上的DNA(蟹)片断经过碱处理使DNA双链解开，成为单链，准备与DNA探针杂交。再将凝较中和至中性。

5 萨森印迹转移：将凝胶板上被分离的DNA(蟹)片断转移到硝酸纤维薄膜上或者尼龙膜上。







DNA指纹图谱法的基本操作

　　从生物样品中提取DNA（DNA一般都有部分的降解），可运用PCR技术扩增出高可变位点（如VNTR系统，串联重复的小卫星DNA等）或者完整的基因组DNA，然后将扩增出的DNA酶切成DNA(蟹)片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基序列的DNA(蟹)片段杂交，用放射自显影便可获得DNA指纹图谱。 　　琼脂糖凝胶
电泳是分离，鉴定和纯化DNA(蟹)片段的常规方法。利用低浓度的荧光嵌入染料-溴化乙锭进行染色，可确定DNA在凝胶中的位置。如有必要，还可以从凝胶中 回收DNA条带，用于各种克隆操作。琼脂糖凝胶的分辨能力要比聚丙烯酰胺凝胶低，但其分离范围较广。用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为200bp