志贺氏菌检验

革兰氏阴性短杆菌

增菌分离

初步生化试验 血清凝集试验革兰氏染色

增菌固体样品：25g(电子天平) 稀释瓶或具 液体样品：25mL(25mL吸量管) 塞广口瓶 + 225mLGN增菌液(量筒),混匀。 培养(于36℃±1℃培养6~8h)注意：液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。

分离

从阳性增菌液中用接种环取1环 1环HE琼脂平板，划线麦康凯琼脂平板，划线

36℃±1 ℃ 培养 18~24h

HE琼脂平 板

麦康凯琼脂 平板

开始处

开始处

平板划线示意图

HE琼脂平板上的典型 菌落特征：呈透明， 不发酵乳糖菌落

麦康凯琼脂平板上的 典型菌落特征：呈透 明，不发酵乳糖菌落

初步生化试验取有明显典型菌落的HE或麦康凯琼脂平板 (在放阳性物品处)

或

三糖铁斜面：先划线，后穿刺于36℃±1℃ 培养18~24h

典型菌落 (同一菌落)葡萄糖半固体：穿刺

于36℃±1℃ 培养18~24h

斜面划线方法斜面穿刺方法

对照试验

三糖铁斜面培养结果： 上层红色，下层黄色 (产酸)

红色：产碱黄色：产酸

黑色：产硫化氢

葡萄糖半固体培养 结果：沿穿刺线 生长，无动力

对照试验

葡萄糖半固体

从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面取1环，染色。革兰氏染色结果： G-(红色，短杆菌，无荚膜， 无芽孢)在无菌室中固 定，到微生物 实训室染色

血清凝集试验① 滴1~2滴灭菌 生理盐水

②从有典型志贺氏菌的 三糖铁斜面上用接种 环取1环①滴1~2滴志贺 氏菌多价血清 结果：志贺氏菌多价血清：凝固 灭菌生理盐水：不凝固

玻片用记号笔在玻片 中间画条线

革兰氏染色步骤：涂片—— 火焰固定——结晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒染—— 乙醇

脱色—— 水洗—— 吸干—— 番红或沙磺复染—— 水洗—— 干燥—— 镜

检

涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取 菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不 宜过多；涂片必须均匀。 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，不可过热，以载 玻片不烫手背为宜。

结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，染色1min。

水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。

碘液媒染：加碘液媒染1min,然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。

乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大 约需要20 ~ 30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s,用吸水 纸吸干水分。

番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1 ~ 2 min。 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 干燥：于室温下自然干燥

。 观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油镜下观 察。 结果: 革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。