多原核胚胎在辅助生殖技术中的研究进展

报告人：林彭思远 2012-1-10

多原核受精卵染色体组成 多原核胚胎发育及遗传多态性分析 多原核胚胎的移植价值 选择性显微移除多原核受精卵中多余原核以 维持其二倍性

★ 体外生殖技术中多原核胚胎较为常见，且存在遗传物质倍性 的改变，可能会导致多倍体胚胎的出现，因此临床上多原核 受精卵均被遗弃，不用于移植。IVF-3PN约占5%~8.1%,ICSI-3PN约占2.5%~6.2%。

多精受精(IVF-3PN)卵母细胞过熟或不成熟、受精时精子浓度过高、手术取卵过程造成卵 母细胞透明带损伤或先天透明带缺损 女方年龄和穿刺卵泡数与成熟卵的多原核受精卵生成率呈负相关 精液a+b级精子密度与未成熟卵多原核受精卵生成率呈正相关

第二极体未排出(ICSI-3PN)多了一个雌原核的三原核受精卵 有报道指出ICSI后的3PN可能是由于严重少弱精患者的双倍体精子产 生的。从临床立场来看 ，严重少弱精患者在ICSI后有更高获得三倍体胚 胎的可能。Egozcue S,Blanco J,Vidal F,et al. Egozcue1 Diploid sperm and the origin of triploidy.Hum Reprod,2002,17(1):5-7.

染色体组成2009-重庆医科大学有学者对人类异常受精卵及胚胎染色 体组成做过相关研究，共收集IVF来源3PN受精卵及胚胎 323枚。含秋水仙素培养基中培养14-20h后去除透明带、 低渗、梯度固定常规收获染色体。 受精卵 三倍体75.7%

2细胞胚胎 三倍体70.8% >2细胞胚胎 三倍体9.3%,近单倍体(32%),近二倍 体(56%) IVF-3PN受精卵及2细胞胚胎多为三倍体，>2细胞胚胎多 为近二倍体、近单倍体，但染色体核型紊乱

染色体组成2005-汉城国际大学医学生殖研究所有学者采用 4,13,18,21,X and Y六色荧光FISH检测三原核受精卵 染色体组成。 收集常规IVF-3PN胚胎32枚， 50%为非嵌合的，纯三倍体7枚，纯二倍体7枚，纯单倍 体2枚。 三-二倍体嵌合1枚，二-单倍体嵌合9枚，单倍体嵌合4枚， 常染色体非整倍性2枚(三倍体)。

高比例的嵌合是多原核胚胎发育停滞的重要原因

遗传多态性分析2009-广州市生殖与遗传重点实验室对IVF和ICSI中多原核受精 卵的发育及其遗传多态性进行了研究。 分别收集IVF和ICSI治疗中多原核受精卵315个和67个，进行 体外培养，观察比较其发育能力，

并复合扩增2个囊胚细胞DNA和多原核来源的1株胚胎干细胞 的15个短串联重复序列(STR)基因座，分析其STR多态性。13个CODIS基因座、D2S338、D19S433(DNA联合检索系统，所含遗传信息与疾病无关，与遗传体质无关，仅用于个体识别)

胚胎干细胞为小鼠胚胎成纤维细胞传代培养建立的IVF治疗来 源的3PN胚胎干细胞系。

遗传多态性分析结果： 受

精卵卵裂率 IVF 96.8% ICSI 91.0%无显著性差异

胚胎停育率 10.2% 39.3%显著差异

囊胚形成率 8.8% 32.4%显著差异

IVF组和ICSI组多原核受精卵卵裂率无显著差异，但IVF 组胚胎停育率和囊胚形成率显著低于ICSI组。 ICSI过程中对卵母细胞的机械损伤，使细胞骨架结构异常， 导致染色体分裂紊乱，致使发育停滞。 多原核胚胎自身基因的缺陷是导致胚胎停育的原因。 克服了4-细胞阻滞期后的ICSI来源多原核受精卵有更好的 发育能力，所获得的囊胚在遗传学研究方面更有价值。

三个基本等高 的多态性峰

三原核受精卵来源胚胎干细胞的15个STR基因座多态性分析

一个表现为三个基因登高的多态性峰，其余多为峰面积比例接近 2:1的多态性峰，该胚胎为三倍体核型

ICSI-4PN受精卵发育成的囊胚Ⅰ 15个STR基因座均为1个或2个等面积多态性峰，二倍体核型

ICSI-4PN受精卵发育成的囊胚Ⅱ

15个STR基因座均为1个或2个等面积多态性峰，二倍体核型

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STR基因座多态性检测显示，IVF组3PN受精卵来源的胚 胎干细胞为典型的三倍体特征，但ICSI组受精卵来源的2个 囊胚未表现多倍体特征。

★ 有研究显示，用FISH技术检测ICSI-3PN受精卵，其中36% 为二倍体。Grossmann M, Calafell JM, Brandy N, et al. Origin of tripronucleate zygotes after intracytoplasmic sperm injection. Hum Reprod, 1997, 12(12):2762-5.

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高比例二倍体多原核受精卵的存在表明, ICSI 治疗中3PN 受精卵可能因第2极体(Pb2)没有排出或注射了二倍体精子 所致, 也可能因ICSI操作损坏卵母细胞骨架、纺锤体形成错 误导致染色体不能正确分离, 形成一些分散的染色体片段, 从而错误形成多个原核。 甚至有人提出在患者ICSI后无2PN胚胎时，可考虑利用 遗传学诊断技术选择正常核型的3PN胚胎进行移植。但其 在临床应用中的安全性还有待进一步研究。

移植价值★ 应用X/Y双色探针荧光原位杂交对多原核受精卵进行非整倍 体率检测

三倍率(%) 二倍率(%) 单倍率(%)IVF-3PN受精卵 36枚 ICSI-3PN受精卵 32枚 92.31 70.83 3.85 25 3.85 4.17

★ 相对于IVF后的卵子来说，ICSI后的3PN卵子有显著增高的 二倍体率。

★ 取卵较少的患者行ICSI后，如果3PN的卵子占大多数时，对 其形成的胚胎行植入前遗传学诊断(PGD)是必要也是可 行的，可以选择正常的整倍体核型胚胎进行移植，从而得 到正常的妊娠。Kattera S, Chen C. Normal birth after microsurgical enucleation of tripronuclear human zygotes: case report. Hum Reprod 2003;18:1319–22.

★ IVF-3PN: XXX、XXY、XYY,三种核型之间无显著差异 ICSI-3PN: XXX、XXY,无XYY核型 说明在ICSI后的3PN中，多余原核可能是来 …… 此处隐藏：2207字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……